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追寻风轻扬

金虫 (小有名气)

[交流] 实时定量PCR之前做常规PCR,两者的反应程序是不是应该一样啊? 已有2人参与

如题。这几天做常规PCR,内参引物扩增都有引物二聚体,今天想起来之前做荧光定量与常规PCR时的反应程序不一样,是不是统一一下比较好呢?常规pcr的是35个循环,荧光定量的是45个循环。
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幸福只道是寻常
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pilicaizi

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-13 16:44:19
这个没必要程序一样的,定量之前做一步常规pcr是保证你的样品cDNA没有问题,因此不管扩增几个循环,只要能有你的目的片段扩出来就可以,关键是你做定量pcr的结果不能有引物二聚体,需要做一下溶解曲线
愿得一人心,白首不相离
3楼2013-03-13 14:55:43
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lhs521521

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
也可以把荧光定量后的产物进行PCR!
寻找真正的自我!
2楼2013-03-08 17:17:55
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