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yuanalice

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化的高手指点呀,阳离子交换层析的条件选择

我需要纯化的目的蛋白等电点为9.0,想用CM Sepharose F F柱纯化,之前的师兄用的是0-1M NaCL的50mM,pH 4.5 的NaAC的缓冲液线性梯度洗脱,可是我看群里讨论的多数使用磷酸盐缓冲液,想问问这两种不同的缓冲液有什么区别呢?是不是分离蛋白的效果不同呀!
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yuanalice

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-02-28 08:39:07
你的蛋白等电点不是9.0吗?难道是你写错了或者我看错了?总之是采用的缓冲液最好不要超过等电点太远,否则蛋白质是不稳定的,一般来说,我都用偏离1.5左右,如果要确保离子交换能吸附上,那么两个pH的偏差也足够了。 ...

我的意思是等电点在4.5左右的蛋白会不稳定的,蛋白质在等电点附近容易沉淀吧,明白你的意思了,多谢你的意见呀!
6楼2013-02-28 10:08:53
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yuanalice: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-02-28 01:11:49
磷酸盐用的比较多,根据个人的喜好吧,区别肯定是有的,应该不会太大。
2楼2013-02-27 13:15:06
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yuanalice: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-02-28 01:11:35
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-03-01 01:13:13
你的蛋白质等电点是9.0,而你要用4.5的缓冲液,相差这么多,你不怕你的蛋白质不稳定吗?一般来说,离子交换的时候,偏离开等电点1-2个pH就足够了,pH相差越大,蛋白质反而不稳定。因此,建议你尝试pH7.0的缓冲液,Tirs-HCl、磷酸盐缓冲液或者HEPES,都可以。
3楼2013-02-27 13:50:00
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yuanalice

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-02-27 13:50:00
你的蛋白质等电点是9.0,而你要用4.5的缓冲液,相差这么多,你不怕你的蛋白质不稳定吗?一般来说,离子交换的时候,偏离开等电点1-2个pH就足够了,pH相差越大,蛋白质反而不稳定。因此,建议你尝试pH7.0的缓冲液,T ...

要是用PH4.5的缓冲溶液,不是等电点在这附近的蛋白质会比较不稳定吗,容易沉淀,为什么PH相差越大越不稳定呢,你能不能详细解释一下呀!很感谢你的回复!
4楼2013-02-28 01:11:17
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