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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取问题
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jenkyamy

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取问题

我把空载体（5900）转化到大肠杆菌里面，然后小题质粒，却发现最亮条带居然在10000bp之上，而且最亮条带下面还有很暗的条带。而且这很暗的条带和我单酶切载体之后是在同一排。我在做实验过程当中，动作已经很温柔了。请各位专家帮忙下，是什么原因提不到我想要的载体？泳道1是Marker,10000,8000,5000,2000,1000,750,600,500.。2,3,4,5,6,7泳道是我小提质粒载体，第8泳道是提的质粒单酶切。

电泳图.png
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1楼 2013-01-28 23:27:27
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你的质粒样子还是可以的，至于大小，质粒经常会跑出不正常的大小来，应该没什么问题的吧。要不你做个酶切再跑跑看大小如何

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学习中
2楼2013-01-28 23:37:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提质粒用的手提还是试剂盒？一般盒子提完的质粒超螺旋构象，在胶上跑得快，自己手提往往有较多线性或者开环的。我觉得你的质粒可能是开环构象吧。按照2L的建议，把提的质粒做一下单酶切，可以更好的判断大小。
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3楼2013-01-29 01:24:32
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三吉草

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的，如果质粒没有酶切，环状的话是要比线状开环的跑的快的，和1楼建议一样，做个酶切在跑跑看
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4楼2013-01-29 06:06:45
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要鉴定是不是你的质粒，可以根据酶切图谱，使用各种酶，把主要部件都切下来，跑个电泳看看。
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5楼2013-01-29 09:18:44
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用酶切图谱
2 测序，确定你空载体对否。个人认为你的质粒可能有问题
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shine
6楼2013-01-29 16:18:27
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jenkyamy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-29 01:24:32
你提质粒用的手提还是试剂盒？一般盒子提完的质粒超螺旋构象，在胶上跑得快，自己手提往往有较多线性或者开环的。我觉得你的质粒可能是开环构象吧。按照2L的建议，把提的质粒做一下单酶切，可以更好的判断大小。

最右边就是我做单酶切的
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7楼2013-01-29 18:29:43
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jenkyamy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-28 23:37:41
感觉你的质粒样子还是可以的，至于大小，质粒经常会跑出不正常的大小来，应该没什么问题的吧。要不你做个酶切再跑跑看大小如何

最右边泳道就是我做单酶切的，大概在5000-8000bp。我的质粒是5900bp
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8楼2013-01-29 18:33:14
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by jenkyamy at 2013-01-29 18:33:14
最右边泳道就是我做单酶切的，大概在5000-8000bp。我的质粒是5900bp...

应该是没问题的，就是你的marker有点没跑开，挤在一起了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-01-29 23:19:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jenkyamy at 2013-01-29 18:29:43
最右边就是我做单酶切的...

如果是6K的质粒，建议用浓度稍微稀一点的胶跑电泳，便于观察单酶切质粒大小是否正确。
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10楼2013-01-30 08:36:19
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