24小时热门版块排行榜    

查看: 1295  |  回复: 10

jenkyamy

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取问题

我把空载体(5900)转化到大肠杆菌里面,然后小题质粒,却发现最亮条带居然在10000bp之上,而且最亮条带下面还有很暗的条带。而且这很暗的条带和我单酶切载体之后是在同一排。我在做实验过程当中,动作已经很温柔了。请各位专家帮忙下,是什么原因提不到我想要的载体?泳道1是Marker,10000,8000,5000,2000,1000,750,600,500.。2,3,4,5,6,7泳道是我小提质粒载体,第8泳道是提的质粒单酶切。

电泳图.png
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉你的质粒样子还是可以的,至于大小,质粒经常会跑出不正常的大小来,应该没什么问题的吧。要不你做个酶切再跑跑看大小如何

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学习中
2楼2013-01-28 23:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你提质粒用的手提还是试剂盒?一般盒子提完的质粒超螺旋构象,在胶上跑得快,自己手提往往有较多线性或者开环的。我觉得你的质粒可能是开环构象吧。按照2L的建议,把提的质粒做一下单酶切,可以更好的判断大小。
3楼2013-01-29 01:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三吉草

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是的,如果质粒没有酶切,环状的话是要比线状开环的跑的快的,和1楼建议一样,做个酶切在跑跑看
4楼2013-01-29 06:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
要鉴定是不是你的质粒,可以根据酶切图谱,使用各种酶,把主要部件都切下来,跑个电泳看看。
5楼2013-01-29 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用酶切图谱
2 测序,确定你空载体对否。个人认为你的质粒可能有问题
shine
6楼2013-01-29 16:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jenkyamy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-29 01:24:32
你提质粒用的手提还是试剂盒?一般盒子提完的质粒超螺旋构象,在胶上跑得快,自己手提往往有较多线性或者开环的。我觉得你的质粒可能是开环构象吧。按照2L的建议,把提的质粒做一下单酶切,可以更好的判断大小。

最右边就是我做单酶切的
7楼2013-01-29 18:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jenkyamy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-28 23:37:41
感觉你的质粒样子还是可以的,至于大小,质粒经常会跑出不正常的大小来,应该没什么问题的吧。要不你做个酶切再跑跑看大小如何

最右边泳道就是我做单酶切的,大概在5000-8000bp。我的质粒是5900bp
8楼2013-01-29 18:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by jenkyamy at 2013-01-29 18:33:14
最右边泳道就是我做单酶切的,大概在5000-8000bp。我的质粒是5900bp...

应该是没问题的,就是你的marker有点没跑开,挤在一起了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学习中
9楼2013-01-29 23:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jenkyamy at 2013-01-29 18:29:43
最右边就是我做单酶切的...

如果是6K的质粒,建议用浓度稍微稀一点的胶跑电泳,便于观察单酶切质粒大小是否正确。
10楼2013-01-30 08:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jenkyamy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见