应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取问题
111/2返回列表12下一页
查看: 1295  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jenkyamy

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒提取问题

我把空载体（5900）转化到大肠杆菌里面，然后小题质粒，却发现最亮条带居然在10000bp之上，而且最亮条带下面还有很暗的条带。而且这很暗的条带和我单酶切载体之后是在同一排。我在做实验过程当中，动作已经很温柔了。请各位专家帮忙下，是什么原因提不到我想要的载体？泳道1是Marker,10000,8000,5000,2000,1000,750,600,500.。2,3,4,5,6,7泳道是我小提质粒载体，第8泳道是提的质粒单酶切。

电泳图.png
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-28 23:27:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉你的质粒样子还是可以的，至于大小，质粒经常会跑出不正常的大小来，应该没什么问题的吧。要不你做个酶切再跑跑看大小如何

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
学习中
2楼2013-01-28 23:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提质粒用的手提还是试剂盒？一般盒子提完的质粒超螺旋构象，在胶上跑得快，自己手提往往有较多线性或者开环的。我觉得你的质粒可能是开环构象吧。按照2L的建议，把提的质粒做一下单酶切，可以更好的判断大小。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-29 01:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三吉草

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是的，如果质粒没有酶切，环状的话是要比线状开环的跑的快的，和1楼建议一样，做个酶切在跑跑看
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-29 06:06:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
要鉴定是不是你的质粒，可以根据酶切图谱，使用各种酶，把主要部件都切下来，跑个电泳看看。
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-29 09:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用酶切图谱
2 测序，确定你空载体对否。个人认为你的质粒可能有问题
赞一下 回复此楼
shine
6楼2013-01-29 16:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jenkyamy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-29 01:24:32
你提质粒用的手提还是试剂盒？一般盒子提完的质粒超螺旋构象，在胶上跑得快，自己手提往往有较多线性或者开环的。我觉得你的质粒可能是开环构象吧。按照2L的建议，把提的质粒做一下单酶切，可以更好的判断大小。

最右边就是我做单酶切的
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-29 18:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jenkyamy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by WilliamHJ at 2013-01-28 23:37:41
感觉你的质粒样子还是可以的，至于大小，质粒经常会跑出不正常的大小来，应该没什么问题的吧。要不你做个酶切再跑跑看大小如何

最右边泳道就是我做单酶切的，大概在5000-8000bp。我的质粒是5900bp
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-29 18:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WilliamHJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by jenkyamy at 2013-01-29 18:33:14
最右边泳道就是我做单酶切的，大概在5000-8000bp。我的质粒是5900bp...

应该是没问题的，就是你的marker有点没跑开，挤在一起了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
学习中
9楼2013-01-29 23:19:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jenkyamy at 2013-01-29 18:29:43
最右边就是我做单酶切的...

如果是6K的质粒，建议用浓度稍微稀一点的胶跑电泳，便于观察单酶切质粒大小是否正确。
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-30 08:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jenkyamy 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上意见出来了 +11 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 20/1000 2026-08-31 17:36 by dxcharlary
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭