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cndk014

铁虫 (初入文坛)

[求助] 这两天的【电泳】 ,胶有问题,请大家看看

05V,70mA电泳40min,胶20ml,2%,片段是100,200,300的
前天能出结果,如图一

换过凝胶就全部变成白色,再换缓冲液,结果也是一样,如图二

逐项排除,估计是这样
1缓冲液:1周前配的缓冲液,出的是一图的结果;两天前刚换就出问题,再换一次仍然有第二图的结果,不排除是原液或者纯水机的问题;
2胶及实验器材:所有实验器材实验前都用去离子水清洗,包括胶槽和电泳槽,胶是本人自用,称量后立刻盖好;扔不能排除器材污染的原因
3成像系统:可以排除换一台平时大家都不用的成像仪,得出的结果类似。

另外我用的是goldview,看说明书说sybrgreen对100bp一下条带支持较好,是不是需要更换?

lenovo 2013-01-22 21 时 22 分酶切可见120及220条带,但不甚清晰,需改进凝胶制法.jpg



lenovo 2013-01-25 17 时 30 分.jpg
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-26 17:06:35
会不会是goldview加多了?而且感觉上在胶中没混匀。如果跟以前的手法都一样,考虑一下加goldview的移液器是不是有问题了。
2楼2013-01-26 07:49:30
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-26 17:06:39
你这个胶是现配现用的吗?配胶加热时要让琼脂全部溶解成无色透明液体。
成像时可以调下明暗度和对比度
生物化学与分子生物学
3楼2013-01-26 10:15:02
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cndk014

铁虫 (初入文坛)

1949stone: 没啥要领 摇摇就行 2013-01-27 08:22:20
引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2013-01-26 07:49:30
会不会是goldview加多了?而且感觉上在胶中没混匀。如果跟以前的手法都一样,考虑一下加goldview的移液器是不是有问题了。

应该不会有移液器的问题;这个星期我一直在做胶,只有这两天的有问题
在胶中混匀有什么特别的要领吗~~
4楼2013-01-27 02:21:22
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cndk014

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2013-01-26 10:15:02
你这个胶是现配现用的吗?配胶加热时要让琼脂全部溶解成无色透明液体。
成像时可以调下明暗度和对比度

是现配的
二图里面背景跟marker一样亮,成像的调节解决不了。。
5楼2013-01-27 02:22:45
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leeyahao

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 也许吧 2013-01-27 08:21:06
1.配制凝胶的琼脂糖可能质量不好,换一下试试
2.胶不要反复融化使用,这样浓度会很高,在加热过程中部分胶会糊。
leeyahao
6楼2013-01-27 07:01:50
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三吉草

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


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cndk014: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-27 18:47:15
别人出的图也是同样情况吗?你出的图像是废胶重复利用的结果,既然你说是现配现用的,胶好像是没有完全熔化,EB(不知道你用的什么,goldview)之类的没有完全分散开。另外,你可以试着把成像仪放胶的底板擦干净,你的图背景很脏,或许有可能是放胶的的板上有别人的废胶,总之你可以试试
7楼2013-01-27 09:50:28
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
goldview没有完全混匀,是不是温度太低,很快就凝固了,没有混好,下次注意将其完全混匀就好了
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
8楼2013-01-27 14:22:58
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秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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你的EB是在胶里还是最后泡的,泡的话是不是EB加多了?
认真过好每一天!
9楼2013-01-27 14:24:49
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cndk014

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-01-27 14:24:49
你的EB是在胶里还是最后泡的,泡的话是不是EB加多了?

用的GOLDVIEW,制胶时加入的
10楼2013-01-27 18:46:46
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