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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这两天的【电泳】 ，胶有问题，请大家看看
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cndk014

铁虫 (初入文坛)

[求助] 这两天的【电泳】 ，胶有问题，请大家看看

05V，70mA电泳40min，胶20ml，2%，片段是100,200，300的
前天能出结果，如图一

换过凝胶就全部变成白色，再换缓冲液，结果也是一样，如图二

逐项排除，估计是这样
1缓冲液：1周前配的缓冲液，出的是一图的结果；两天前刚换就出问题，再换一次仍然有第二图的结果，不排除是原液或者纯水机的问题；
2胶及实验器材：所有实验器材实验前都用去离子水清洗，包括胶槽和电泳槽，胶是本人自用，称量后立刻盖好；扔不能排除器材污染的原因
3成像系统：可以排除换一台平时大家都不用的成像仪，得出的结果类似。

另外我用的是goldview，看说明书说sybrgreen对100bp一下条带支持较好，是不是需要更换？

lenovo 2013-01-22 21 时 22 分酶切可见120及220条带，但不甚清晰，需改进凝胶制法.jpg



lenovo 2013-01-25 17 时 30 分.jpg
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1楼 2013-01-26 00:28:33
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henryxue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-26 17:06:35
会不会是goldview加多了？而且感觉上在胶中没混匀。如果跟以前的手法都一样，考虑一下加goldview的移液器是不是有问题了。
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2楼2013-01-26 07:49:30
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-26 17:06:39
你这个胶是现配现用的吗？配胶加热时要让琼脂全部溶解成无色透明液体。
成像时可以调下明暗度和对比度
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生物化学与分子生物学
3楼2013-01-26 10:15:02
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cndk014

铁虫 (初入文坛)
1949stone: 没啥要领 摇摇就行 2013-01-27 08:22:20
引用回帖:
2楼: Originally posted by henryxue at 2013-01-26 07:49:30
会不会是goldview加多了？而且感觉上在胶中没混匀。如果跟以前的手法都一样，考虑一下加goldview的移液器是不是有问题了。

应该不会有移液器的问题；这个星期我一直在做胶，只有这两天的有问题
在胶中混匀有什么特别的要领吗~~
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4楼2013-01-27 02:21:22
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cndk014

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lidonghong at 2013-01-26 10:15:02
你这个胶是现配现用的吗？配胶加热时要让琼脂全部溶解成无色透明液体。
成像时可以调下明暗度和对比度

是现配的
二图里面背景跟marker一样亮，成像的调节解决不了。。
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5楼2013-01-27 02:22:45
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leeyahao

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 也许吧 2013-01-27 08:21:06
1.配制凝胶的琼脂糖可能质量不好，换一下试试
2.胶不要反复融化使用，这样浓度会很高，在加热过程中部分胶会糊。
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leeyahao
6楼2013-01-27 07:01:50
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三吉草

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cndk014: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-27 18:47:15
别人出的图也是同样情况吗？你出的图像是废胶重复利用的结果，既然你说是现配现用的，胶好像是没有完全熔化，EB（不知道你用的什么，goldview）之类的没有完全分散开。另外，你可以试着把成像仪放胶的底板擦干净，你的图背景很脏，或许有可能是放胶的的板上有别人的废胶，总之你可以试试
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7楼2013-01-27 09:50:28
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
goldview没有完全混匀，是不是温度太低，很快就凝固了，没有混好，下次注意将其完全混匀就好了
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
8楼2013-01-27 14:22:58
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秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的EB是在胶里还是最后泡的，泡的话是不是ＥＢ加多了？
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认真过好每一天！
9楼2013-01-27 14:24:49
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cndk014

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-01-27 14:24:49
你的EB是在胶里还是最后泡的，泡的话是不是ＥＢ加多了？

用的GOLDVIEW，制胶时加入的
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10楼2013-01-27 18:46:46
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