应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA甲基化实验中的疑惑
141/2返回列表12下一页
查看: 2169  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

农田耕者

金虫 (小有名气)

[求助] DNA甲基化实验中的疑惑 已有1人参与

最近一直在做种子的甲基化，从种子胚中提取的DNA，质量和浓度都还不错，260/280和260/230均在1.9-2.0之间，浓度2000μg/L，酶切用的是ECORI和HPAII（快酶），连接、预扩、选扩，效果一直不是很满意，聚丙烯酰胺凝胶电泳的效果不是很好，时而可以跑出条带，时而弥散一片。
有几个问题：1、酶切后用不用纯化，如果不纯化，连接接头的时候容易吗？连接后如何检测是否连接上了？2、有没有做过DNA甲基化分析的高手（MSAP），求各个步骤的体系？3、在这个实验过程中，最经常出现的问题是什么？
先谢谢各位高手了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
还行
1楼 2013-01-20 16:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

水中小妖

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:52
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。
赞一下(2人) 回复此楼
路漫漫其修远，吾将上下而求索~
6楼2013-04-17 22:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

闹闹女巫

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:38
请问您用的内切酶是哪个公司的？我也在做MSAP   最后条带弥散一片  可能是你的DNA破坏了 也就是说DNA断掉了  以至于部分接头没接上  检测到的是接头片段  及短的DNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-02-27 13:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡凯凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 水中小妖 at 2013-04-17 22:49:16
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。

想请问你 有没有具体的浓度，及预扩， 选扩稀释倍数呀   我都做了好几个月了 也出不来~能不能帮帮忙啊
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-03-04 16:25:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lnsbsmillet

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-18 08:24:29
1 最好不要纯化，会对DNA产生影响
2 如果有材料可以重新提一下DNA，重新连接、、、、、、，如果还不行，可能就是酶的毛病了，重新稀释一下。
做分子实验必须认真，每个环节都很重要，否则，不容易成功。
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-01 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-17 21:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

农田耕者

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ADTechnology at 2013-04-17 21:01:17
您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？

没用盒子，全是自己配的试剂，买的内切酶，fastdigest
赞一下 回复此楼
还行
5楼2013-04-17 21:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tyh126

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-30 18:05:53
酶切后不用纯化，连接后检测是否连接上了用电泳
各个步骤的体系在西瓜的文献里有i查查
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-30 17:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡凯凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 水中小妖 at 2013-04-17 22:49:16
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。

你有没有具体的稀释倍数？
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-04 16:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yz2007433052

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

methods in molecular biology 里边有一个DNA methylation的专题，我觉得里边有一篇好像是讲酶切后纯化的
赞一下 回复此楼
激浪青春！
10楼2015-03-07 09:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 农田耕者 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +6 archvillain 2026-08-15 10/500 2026-08-15 14:29 by 枫叶之巅
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 8/400 2026-08-15 11:53 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +6 Ldrop2023 2026-08-13 6/300 2026-08-15 10:09 by tuanggou
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭