应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA甲基化实验中的疑惑
51/1返回列表
查看: 2338  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

农田耕者

金虫 (小有名气)

[求助] DNA甲基化实验中的疑惑 已有1人参与

最近一直在做种子的甲基化，从种子胚中提取的DNA，质量和浓度都还不错，260/280和260/230均在1.9-2.0之间，浓度2000μg/L，酶切用的是ECORI和HPAII（快酶），连接、预扩、选扩，效果一直不是很满意，聚丙烯酰胺凝胶电泳的效果不是很好，时而可以跑出条带，时而弥散一片。
有几个问题：1、酶切后用不用纯化，如果不纯化，连接接头的时候容易吗？连接后如何检测是否连接上了？2、有没有做过DNA甲基化分析的高手（MSAP），求各个步骤的体系？3、在这个实验过程中，最经常出现的问题是什么？
先谢谢各位高手了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
还行
1楼 2013-01-20 16:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

闹闹女巫

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:38
请问您用的内切酶是哪个公司的？我也在做MSAP   最后条带弥散一片  可能是你的DNA破坏了 也就是说DNA断掉了  以至于部分接头没接上  检测到的是接头片段  及短的DNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-02-27 13:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

lnsbsmillet

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-18 08:24:29
1 最好不要纯化，会对DNA产生影响
2 如果有材料可以重新提一下DNA，重新连接、、、、、、，如果还不行，可能就是酶的毛病了，重新稀释一下。
做分子实验必须认真，每个环节都很重要，否则，不容易成功。
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-01 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-17 21:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

农田耕者

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ADTechnology at 2013-04-17 21:01:17
您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？

没用盒子，全是自己配的试剂，买的内切酶，fastdigest
赞一下 回复此楼
还行
5楼2013-04-17 21:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭