应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA甲基化实验中的疑惑
141/2返回列表12下一页
查看: 1866  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

农田耕者

金虫 (小有名气)

[求助] DNA甲基化实验中的疑惑 已有1人参与

最近一直在做种子的甲基化，从种子胚中提取的DNA，质量和浓度都还不错，260/280和260/230均在1.9-2.0之间，浓度2000μg/L，酶切用的是ECORI和HPAII（快酶），连接、预扩、选扩，效果一直不是很满意，聚丙烯酰胺凝胶电泳的效果不是很好，时而可以跑出条带，时而弥散一片。
有几个问题：1、酶切后用不用纯化，如果不纯化，连接接头的时候容易吗？连接后如何检测是否连接上了？2、有没有做过DNA甲基化分析的高手（MSAP），求各个步骤的体系？3、在这个实验过程中，最经常出现的问题是什么？
先谢谢各位高手了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
还行
1楼 2013-01-20 16:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

水中小妖

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:52
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。
赞一下(2人) 回复此楼
路漫漫其修远，吾将上下而求索~
6楼2013-04-17 22:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

闹闹女巫

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:38
请问您用的内切酶是哪个公司的？我也在做MSAP   最后条带弥散一片  可能是你的DNA破坏了 也就是说DNA断掉了  以至于部分接头没接上  检测到的是接头片段  及短的DNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-02-27 13:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡凯凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 水中小妖 at 2013-04-17 22:49:16
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。

想请问你 有没有具体的浓度，及预扩， 选扩稀释倍数呀   我都做了好几个月了 也出不来~能不能帮帮忙啊
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-03-04 16:25:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lnsbsmillet

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-18 08:24:29
1 最好不要纯化，会对DNA产生影响
2 如果有材料可以重新提一下DNA，重新连接、、、、、、，如果还不行，可能就是酶的毛病了，重新稀释一下。
做分子实验必须认真，每个环节都很重要，否则，不容易成功。
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-01 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-17 21:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

农田耕者

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ADTechnology at 2013-04-17 21:01:17
您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？

没用盒子，全是自己配的试剂，买的内切酶，fastdigest
赞一下 回复此楼
还行
5楼2013-04-17 21:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tyh126

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-30 18:05:53
酶切后不用纯化，连接后检测是否连接上了用电泳
各个步骤的体系在西瓜的文献里有i查查
赞一下 回复此楼
7楼2013-08-30 17:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡凯凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 水中小妖 at 2013-04-17 22:49:16
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。

你有没有具体的稀释倍数？
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-04 16:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yz2007433052

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

methods in molecular biology 里边有一个DNA methylation的专题，我觉得里边有一篇好像是讲酶切后纯化的
赞一下 回复此楼
激浪青春！
10楼2015-03-07 09:27:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 农田耕者 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 268求调剂 +3 简单点0 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:15 by wangjihu
[考研] 311求调剂 +9 冬十三 2026-03-15 10/500 2026-03-17 22:53 by lbsjt
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +4 share_joy 2026-03-16 4/200 2026-03-17 21:32 by hmn_wj
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 化学工程321分求调剂 +11 大米饭！ 2026-03-15 14/700 2026-03-17 17:11 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭