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农田耕者

金虫 (小有名气)

[求助] DNA甲基化实验中的疑惑 已有1人参与

最近一直在做种子的甲基化,从种子胚中提取的DNA,质量和浓度都还不错,260/280和260/230均在1.9-2.0之间,浓度2000μg/L,酶切用的是ECORI和HPAII(快酶),连接、预扩、选扩,效果一直不是很满意,聚丙烯酰胺凝胶电泳的效果不是很好,时而可以跑出条带,时而弥散一片。
有几个问题:1、酶切后用不用纯化,如果不纯化,连接接头的时候容易吗?连接后如何检测是否连接上了?2、有没有做过DNA甲基化分析的高手(MSAP),求各个步骤的体系?3、在这个实验过程中,最经常出现的问题是什么?
先谢谢各位高手了
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还行
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水中小妖

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:52
我做过MSAP,给我的感觉是每一步都非常重要,第一次做的时候每一步一定要检测!而且一定要注意各个接头、酶的浓度,还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数!如果稀释倍数过小的话,上板跑也会是一片弥散。
路漫漫其修远,吾将上下而求索~
6楼2013-04-17 22:49:16
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