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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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农田耕者

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] DNA甲基化实验中的疑惑 已有1人参与

最近一直在做种子的甲基化，从种子胚中提取的DNA，质量和浓度都还不错，260/280和260/230均在1.9-2.0之间，浓度2000μg/L，酶切用的是ECORI和HPAII（快酶），连接、预扩、选扩，效果一直不是很满意，聚丙烯酰胺凝胶电泳的效果不是很好，时而可以跑出条带，时而弥散一片。
有几个问题：1、酶切后用不用纯化，如果不纯化，连接接头的时候容易吗？连接后如何检测是否连接上了？2、有没有做过DNA甲基化分析的高手（MSAP），求各个步骤的体系？3、在这个实验过程中，最经常出现的问题是什么？
先谢谢各位高手了
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还行
1楼 2013-01-20 16:07:51
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农田耕者

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by ADTechnology at 2013-04-17 21:01:17
您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？

没用盒子，全是自己配的试剂，买的内切酶，fastdigest
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还行
5楼2013-04-17 21:18:37
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lnsbsmillet

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-18 08:24:29
1 最好不要纯化，会对DNA产生影响
2 如果有材料可以重新提一下DNA，重新连接、、、、、、，如果还不行，可能就是酶的毛病了，重新稀释一下。
做分子实验必须认真，每个环节都很重要，否则，不容易成功。
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2楼2013-02-01 21:40:40
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闹闹女巫

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:38
请问您用的内切酶是哪个公司的？我也在做MSAP   最后条带弥散一片  可能是你的DNA破坏了 也就是说DNA断掉了  以至于部分接头没接上  检测到的是接头片段  及短的DNA
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3楼2013-02-27 13:06:14
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ADTechnology

新虫

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？
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4楼2013-04-17 21:01:17
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