应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA甲基化实验中的疑惑
51/1返回列表
查看: 1869  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

农田耕者

金虫 (小有名气)

[求助] DNA甲基化实验中的疑惑 已有1人参与

最近一直在做种子的甲基化，从种子胚中提取的DNA，质量和浓度都还不错，260/280和260/230均在1.9-2.0之间，浓度2000μg/L，酶切用的是ECORI和HPAII（快酶），连接、预扩、选扩，效果一直不是很满意，聚丙烯酰胺凝胶电泳的效果不是很好，时而可以跑出条带，时而弥散一片。
有几个问题：1、酶切后用不用纯化，如果不纯化，连接接头的时候容易吗？连接后如何检测是否连接上了？2、有没有做过DNA甲基化分析的高手（MSAP），求各个步骤的体系？3、在这个实验过程中，最经常出现的问题是什么？
先谢谢各位高手了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
还行
1楼 2013-01-20 16:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡凯凤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 水中小妖 at 2013-04-17 22:49:16
我做过MSAP，给我的感觉是每一步都非常重要，第一次做的时候每一步一定要检测！而且一定要注意各个接头、酶的浓度，还有连接产物的用量和预扩产物的稀释倍数！如果稀释倍数过小的话，上板跑也会是一片弥散。

你有没有具体的稀释倍数？
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-04 16:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

lnsbsmillet

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-18 08:24:29
1 最好不要纯化，会对DNA产生影响
2 如果有材料可以重新提一下DNA，重新连接、、、、、、，如果还不行，可能就是酶的毛病了，重新稀释一下。
做分子实验必须认真，每个环节都很重要，否则，不容易成功。
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-01 21:40:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

闹闹女巫

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:24:38
请问您用的内切酶是哪个公司的？我也在做MSAP   最后条带弥散一片  可能是你的DNA破坏了 也就是说DNA断掉了  以至于部分接头没接上  检测到的是接头片段  及短的DNA
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-02-27 13:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ADTechnology

捐助贵宾 (著名写手)

表观遗传学专业供应商

【答案】应助回帖

您甲基化的盒子使用的是那个公司的呢？
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-17 21:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +7 SUICHILD 2026-03-12 7/350 2026-03-18 18:31 by 30660438
[考研] 材料专业求调剂 +3 hanamiko 2026-03-18 3/150 2026-03-18 16:30 by 30660438
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +3 蔡大美女 2026-03-13 3/150 2026-03-18 15:53 by jhhcooi
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +6 困于星晨 2026-03-17 6/300 2026-03-18 10:21 by kkcoco25
[考研] 307求调剂 +3 冷笙123 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:55 by macy2011
[考研] 278求调剂 +5 烟火先于春 2026-03-17 5/250 2026-03-18 08:43 by 星空星月
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭