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新虫 (小有名气)

[交流] trizol 提RNA,DNA酶的问题 已有7人参与

trizol 提RNA。在反转录之前加DNA酶消化DNA,对反转录有很大影响。
在提取RNA过程中加DNA酶可以吗,在加入trizol 液之后顺便加DNA酶,加入氯仿后DNA酶随蛋白一起沉降。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

你可以试试,不过我认为trizol里面有酚,会使蛋白变性的。
2楼2013-01-17 10:33:32
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lma223

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
DNase treatment对反转录不会有多大影响,你需要加DNase inhibitor 将DNase沉降或者直接过RNA column会去除掉Dnase。
知行合一,致良知!
3楼2013-01-17 13:12:34
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cdl007

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
所有的酶在trizol里都无效,trizol是强变性剂,加了trizol再顺便加啥都是浪费
4楼2013-01-17 15:28:36
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主肯定是贪多了,你使用trizol提取液,只需要100毫克组织的量就可以提取到足够的RNA了,而且只要是在这个范围内你基本上不用考虑DNA的污染问题。如果是要用DNA酶处理,你必须也要把DNA酶处理掉,因为后续反转录生成了cDNA.
好好学习,天天向上
5楼2013-01-17 17:06:27
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chlorella409

木虫 (正式写手)


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trizol里面有成分起到蛋白变性的作用,不然和蛋白结合的RNA怎么提取,你在提取过程中加DNase的话就会全被变性掉的
6楼2013-01-17 17:08:36
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在Trizol中肯定变性失活啊  要不RNA酶早把RNA降解了
7楼2013-01-19 22:05:21
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fdjr

金虫 (著名写手)

所有的酶在trizol里都无效,因为酶的缘故…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2013-01-19 23:44:16
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