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基因文库的评价
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各位虫友：我最近构建了一个细菌的基因文库，所选用的载体是PUC19（载体用BamH酶切），感受态细胞为DH5α，现在我正在对我的文库进行评价。 我做了一下几个方面的工作 1.计算克隆子数，根据计算公式，大于理论克隆子的数目。 2.随机挑取10-20个克隆子，提取其质粒，核酸电泳检测其大小（理论应大于空载体）。再对这些质粒用BamH酶切，查看酶切后连入载体的基因片段大小是否在理论范围内）。 请问：这样评价文库，可以吗？我看了很多人都在考察文库的滴度，可是我这是一个很小的亚文库，需要这样评价吗？ |
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gaojuan1985
新虫 (正式写手)
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您好，我想咨询你一下细菌基因文库构建的问题。 我的是一个革兰氏阳性菌，基因组经Sau 3AI不完全酶切后，与BamHI酶切并CIAP处理后的pUC19连接，然后转化DH5a，但是我的转化涂平板长得克隆很少。pUC19切之后跑胶回收条带清晰，没有弥散。感受态细胞验证没有问题，载体自连的话我用了56 ng pUC进行验证，长了几十个菌落。那么您认为是我的连接有问题还是转化有问题呢？ 会不会是连接的量太少？我10ul的连接体系里面有30 ng的载体，150 ng左右的插入片段（2-5kb），16度16 h左右，然后全部涂板，但是只长了几十个克隆，太郁闷了。 我想问一下，你的连接体系里面，pUC19和插入片段分别加了多少ng？连接了多久呢？ |
2楼2013-04-01 18:59:24
3楼2013-05-16 14:05:37