| 查看: 732 | 回复: 2 | |||
[求助]
基因文库的评价
|
|
各位虫友：我最近构建了一个细菌的基因文库，所选用的载体是PUC19（载体用BamH酶切），感受态细胞为DH5α，现在我正在对我的文库进行评价。 我做了一下几个方面的工作 1.计算克隆子数，根据计算公式，大于理论克隆子的数目。 2.随机挑取10-20个克隆子，提取其质粒，核酸电泳检测其大小（理论应大于空载体）。再对这些质粒用BamH酶切，查看酶切后连入载体的基因片段大小是否在理论范围内）。 请问：这样评价文库，可以吗？我看了很多人都在考察文库的滴度，可是我这是一个很小的亚文库，需要这样评价吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有180人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 构建基因文库（sauA酶切后胶回收 效率低 该怎么办
已经有14人回复
- 小片段基因文库构建中载体的选择
已经有15人回复
- 请给位大侠帮忙指导基因文库构建
已经有4人回复
- 求助-基因的突变文库相关问题
已经有7人回复
- 细菌基因组文库构建的相关问题
已经有23人回复
- 基因组文库构建时DNA酶切片段用胶回收吗？
已经有7人回复
- 基因组文库-----genomic library
已经有11人回复
- 哪个公司可以帮忙做cosmid基因组文库
已经有3人回复
- 苏州凯益公司生物科技有限公司上海研发中心招聘启事
已经有57人回复
- 建基因文库是为什么？弱弱的问一下，新手
已经有11人回复
- 怎样建立基因文库，以及用它建立生物发育树
已经有9人回复
- 关于怎样建立基因文库，并通过文库建系统发育树
已经有9人回复
- 求助：基因组文库构建时一般用什么Marker？
已经有12人回复
- 浙江大学2006年分子生物学考博
已经有8人回复
gaojuan1985
新虫 (正式写手)
- 应助: 57 (初中生)
- 金币: 75.5
- 散金: 839
- 红花: 8
- 帖子: 561
- 在线: 119.6小时
- 虫号: 1374933
- 注册: 2011-08-21
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
|
您好，我想咨询你一下细菌基因文库构建的问题。 我的是一个革兰氏阳性菌，基因组经Sau 3AI不完全酶切后，与BamHI酶切并CIAP处理后的pUC19连接，然后转化DH5a，但是我的转化涂平板长得克隆很少。pUC19切之后跑胶回收条带清晰，没有弥散。感受态细胞验证没有问题，载体自连的话我用了56 ng pUC进行验证，长了几十个菌落。那么您认为是我的连接有问题还是转化有问题呢？ 会不会是连接的量太少？我10ul的连接体系里面有30 ng的载体，150 ng左右的插入片段（2-5kb），16度16 h左右，然后全部涂板，但是只长了几十个克隆，太郁闷了。 我想问一下，你的连接体系里面，pUC19和插入片段分别加了多少ng？连接了多久呢？ |
2楼2013-04-01 18:59:24
3楼2013-05-16 14:05:37
10