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riqqqqdx

银虫 (小有名气)

[求助] 土壤DGGE谱图问题

真心请教关于DGGE方面问题,上面是我做的关于土壤细菌的DGGE,DNA及PCR均很好,但,不明白DGGE图有带不亮有哪些问题?谢谢大家了!
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鸟来吃虫
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riqqqqdx

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小木虫8580 at 2012-12-28 08:46:56
1.用荧光染料还是EB,荧光染料用的GV的还是SYBR的,加了多少ul?至少5ul。你可能是荧光染料加的不够。
2.上样量是多少,我们一般50ul体系的PCR产物全部上完。而且你只跑这么几个泳道为啥用这么细的梳子?
3.凝胶成 ...

首先谢谢你!我用EB染色的,上样量是10ul+5ul的buffer;PCR体系是25ul的。感觉应该不会是成像系统的问题。
鸟来吃虫
5楼2012-12-28 09:18:31
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sunnyface

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能1:上样量太少,加大量,不少于300ng
      2:看你图片拍的不是很清楚,凝胶成像仪最好用Bio-rad
      3:跑的有点糊,胶是不是配的时间太长了(不超过一个月)
2楼2012-12-27 22:28:04
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.用荧光染料还是EB,荧光染料用的GV的还是SYBR的,加了多少ul?至少5ul。你可能是荧光染料加的不够。
2.上样量是多少,我们一般50ul体系的PCR产物全部上完。而且你只跑这么几个泳道为啥用这么细的梳子?
3.凝胶成像系统的曝光时间不够,或者你的光圈调的太小了。
3楼2012-12-28 08:46:56
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riqqqqdx

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sunnyface at 2012-12-27 22:28:04
可能1:上样量太少,加大量,不少于300ng
      2:看你图片拍的不是很清楚,凝胶成像仪最好用Bio-rad
      3:跑的有点糊,胶是不是配的时间太长了(不超过一个月)

首先谢谢你!我的上样量是10ul+buffer5ul;成像仪是没问题的,胶是刚配的。PCR体系是25ul的。。
鸟来吃虫
4楼2012-12-28 09:15:20
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