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714850835

铁虫 (初入文坛)

[求助] 怎么分离抗体和与抗体连接好的材料

将抗体与我们制备的材料（~50nm）用的EDC和NHS连接，最后怎样才能把没连上抗体的洗掉，得到比较纯的连接物呢？ the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min.The lower phase, contain-ing free QDs and isourea,  were discarded. To wash the conju-gate and reduce the impurities, the upper phase, containing QD-IgG, was diluted by 300  L PBS buffer, and additionally subjected to centrifugation at 5000 rmp for 15 min. This washing step was repeated twice. The conjugate was recovered by 100 L of PBS and transferred to a new Eppendorf tube and then stored at 4 °C in a dark until use. 实验刚起步，觉得ODs-lgG的大小跟ODs的差不多耶，因该混在一起吧，不理解文献中的方法。谢谢各位师兄师姐指点~
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1楼 2012-12-23 20:05:25
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714850835

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by abc5710110 at 2012-12-27 10:05:06
他们进行了超滤分离， "the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min"  也 ...

谢谢啦！刚开始做实验还不知道这么高级的方法。
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9楼2012-12-27 10:23:59
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11jxli1

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2012-12-23 22:13:13
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714850835

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 11jxli1 at 2012-12-23 22:13:13
采用专业的化学试剂可也分离

什么试剂呀?
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3楼2012-12-24 07:51:18
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abc5710110

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个要看量子点的粒径大小和在溶液体系中的分散性如何了。
可以试试通过简单离心的方法，蛋白在溶液，4000~5000rpm的离心速度不容易离心下去，如果量子点能够离下去，就能分离开了，然后对离心物进行清洗几次，把结合不牢的洗去就OK了。
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4楼2012-12-24 09:24:00
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