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zhliang986

金虫 (小有名气)

[求助] 做酶标抗体时所用抗体的处理？

我想用HRP标记我的单抗，查了一些资料准备用过碘酸钠法做，我的抗体是用蛋白G柱子纯化后用PH7.4的PBS透析的，之后分装-20保存，我看资料上要用纯的抗体溶在水里，而且得20mg，我的单抗才0.5mg/ml，而且是溶在PBS里的，我用冷冻干燥机做了一次 干燥完都是PBS结晶，请问我怎么处理才能得到单纯的抗体而且保存活性，大家做酶标抗体时都是怎么处理的？谢谢！
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1楼 2012-04-07 11:09:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★
telomerase: 金币+2, 谢谢你的热心应助！！ 2012-04-10 13:15:35
超滤管难在对其分子量的摸索上，用好了，应该说效果还是比较好的。看你怎么运用就是。不知道怎么在小木虫上把文章给你，就把其中一篇的题目给你吧：Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables using monoclonal antibody-based direct competitive ELISA followed by HPLC–MS/MS，其中有一些这篇文章参考的文献也还行。希望对你有用
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zhliang986
Orbetterit,orenjoyit!
4楼2012-04-08 23:13:01
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普通回帖

jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhliang986: 金币+5, ★★★很有帮助, 我听实验室的说超滤管做的效果不是很好，所以我一直没用，你有没有好的文献帮我推荐几篇啊？ 2012-04-08 20:55:36
蛋白浓度有点低呢！建议尝试下超滤管，可以很好的浓缩抗体也能除盐；
再者，现在有很多改进的过碘酸钠法将单抗偶联到HRP上了，可以找找一些文献，不用20mg的，你可以根据投料比进行试验设计。
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Orbetterit,orenjoyit!
2楼2012-04-08 13:09:35
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zhliang986

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jfj_tj at 2012-04-08 13:09:35:
蛋白浓度有点低呢！建议尝试下超滤管，可以很好的浓缩抗体也能除盐；
再者，现在有很多改进的过碘酸钠法将单抗偶联到HRP上了，可以找找一些文献，不用20mg的，你可以根据投料比进行试验设计。

听实验室的说超滤管的效果不是很好，所以一直没用，你有没有做酶标抗体好的文献帮我推荐几篇啊？
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3楼2012-04-08 20:57:44
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华俊

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jfj_tj at 2012-04-08 23:13:01:
超滤管难在对其分子量的摸索上，用好了，应该说效果还是比较好的。看你怎么运用就是。不知道怎么在小木虫上把文章给你，就把其中一篇的题目给你吧：Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables usi ...

试试透析的方式，透析液采用PEG20000，既可以除盐又可以浓缩，不过要选择优质的透析袋和合适的透析孔径，生物公司都有的
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zhliang986
多一份快乐少一分烦恼！
5楼2012-04-09 00:23:07
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zhliang986

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by jfj_tj at 2012-04-08 23:13:01:
超滤管难在对其分子量的摸索上，用好了，应该说效果还是比较好的。看你怎么运用就是。不知道怎么在小木虫上把文章给你，就把其中一篇的题目给你吧：Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables usi ...

谢谢
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6楼2012-04-09 08:20:35
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zhliang986

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 华俊 at 2012-04-09 00:23:07:
试试透析的方式，透析液采用PEG20000，既可以除盐又可以浓缩，不过要选择优质的透析袋和合适的透析孔径，生物公司都有的

我做的是单抗，分子量150KD，之前纯化单抗的时候用的SIGMA的透析袋，PEG浓缩应该还能用吧？
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7楼2012-04-09 08:25:50
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华俊

金虫 (小有名气)
★ ★
telomerase: 金币+2, 谢谢你的热心应助 2012-04-10 13:15:20
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhliang986 at 2012-04-09 08:25:50:
我做的是单抗，分子量150KD，之前纯化单抗的时候用的SIGMA的透析袋，PEG浓缩应该还能用吧？

应该可以呀，但是这种透析袋最好还是用新的，因为用过的可能会影响透析袋的孔径的.............祝实验顺利！
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多一份快乐少一分烦恼！
8楼2012-04-09 13:44:37
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zhliang986

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 华俊 at 2012-04-09 13:44:37:
应该可以呀，但是这种透析袋最好还是用新的，因为用过的可能会影响透析袋的孔径的.............祝实验顺利！

谢谢  浓缩完再重新用PBS透析就可以了吗？
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9楼2012-04-09 18:27:11
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华俊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhliang986: 金币+2, ★有帮助 2012-05-05 08:15:43
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhliang986 at 2012-04-09 18:27:11:
谢谢  浓缩完再重新用PBS透析就可以了吗？

可以的，用PBS透析抗体，最终抗体中也是PBS溶液，透析过程中注意低温，防止抗体失活，实验顺利！
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zhliang986
多一份快乐少一分烦恼！
10楼2012-04-11 22:19:28
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