24小时热门版块排行榜    

查看: 1620  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhliang986

金虫 (小有名气)

[求助] 做酶标抗体时所用抗体的处理?

我想用HRP标记我的单抗,查了一些资料准备用过碘酸钠法做,我的抗体是用蛋白G柱子纯化后用PH7.4的PBS透析的,之后分装-20保存,我看资料上要用纯的抗体溶在水里,而且得20mg,我的单抗才0.5mg/ml,而且是溶在PBS里的,我用冷冻干燥机做了一次 干燥完都是PBS结晶,请问我怎么处理才能得到单纯的抗体而且保存活性,大家做酶标抗体时都是怎么处理的?谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

华俊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhliang986: 金币+2, 有帮助 2012-05-05 08:15:43
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhliang986 at 2012-04-09 18:27:11:
谢谢  浓缩完再重新用PBS透析就可以了吗?

可以的,用PBS透析抗体,最终抗体中也是PBS溶液,透析过程中注意低温,防止抗体失活,实验顺利!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

多一份快乐少一分烦恼!
10楼2012-04-11 22:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhliang986: 金币+5, ★★★很有帮助, 我听实验室的说超滤管做的效果不是很好,所以我一直没用,你有没有好的文献帮我推荐几篇啊? 2012-04-08 20:55:36
蛋白浓度有点低呢!建议尝试下超滤管,可以很好的浓缩抗体也能除盐;
再者,现在有很多改进的过碘酸钠法将单抗偶联到HRP上了,可以找找一些文献,不用20mg的,你可以根据投料比进行试验设计。
Orbetterit,orenjoyit!
2楼2012-04-08 13:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhliang986

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jfj_tj at 2012-04-08 13:09:35:
蛋白浓度有点低呢!建议尝试下超滤管,可以很好的浓缩抗体也能除盐;
再者,现在有很多改进的过碘酸钠法将单抗偶联到HRP上了,可以找找一些文献,不用20mg的,你可以根据投料比进行试验设计。

听实验室的说超滤管的效果不是很好,所以一直没用,你有没有做酶标抗体好的文献帮我推荐几篇啊?
3楼2012-04-08 20:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★
telomerase: 金币+2, 谢谢你的热心应助!! 2012-04-10 13:15:35
超滤管难在对其分子量的摸索上,用好了,应该说效果还是比较好的。看你怎么运用就是。不知道怎么在小木虫上把文章给你,就把其中一篇的题目给你吧:Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables using monoclonal antibody-based direct competitive ELISA followed by HPLC–MS/MS,其中有一些这篇文章参考的文献也还行。希望对你有用

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Orbetterit,orenjoyit!
4楼2012-04-08 23:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见