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zhliang986

金虫 (小有名气)

[求助] 做酶标抗体时所用抗体的处理?

我想用HRP标记我的单抗,查了一些资料准备用过碘酸钠法做,我的抗体是用蛋白G柱子纯化后用PH7.4的PBS透析的,之后分装-20保存,我看资料上要用纯的抗体溶在水里,而且得20mg,我的单抗才0.5mg/ml,而且是溶在PBS里的,我用冷冻干燥机做了一次 干燥完都是PBS结晶,请问我怎么处理才能得到单纯的抗体而且保存活性,大家做酶标抗体时都是怎么处理的?谢谢!
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zhliang986

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 华俊 at 2012-04-09 00:23:07:
试试透析的方式,透析液采用PEG20000,既可以除盐又可以浓缩,不过要选择优质的透析袋和合适的透析孔径,生物公司都有的

我做的是单抗,分子量150KD,之前纯化单抗的时候用的SIGMA的透析袋,PEG浓缩应该还能用吧?
7楼2012-04-09 08:25:50
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhliang986: 金币+5, ★★★很有帮助, 我听实验室的说超滤管做的效果不是很好,所以我一直没用,你有没有好的文献帮我推荐几篇啊? 2012-04-08 20:55:36
蛋白浓度有点低呢!建议尝试下超滤管,可以很好的浓缩抗体也能除盐;
再者,现在有很多改进的过碘酸钠法将单抗偶联到HRP上了,可以找找一些文献,不用20mg的,你可以根据投料比进行试验设计。
Orbetterit,orenjoyit!
2楼2012-04-08 13:09:35
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zhliang986

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jfj_tj at 2012-04-08 13:09:35:
蛋白浓度有点低呢!建议尝试下超滤管,可以很好的浓缩抗体也能除盐;
再者,现在有很多改进的过碘酸钠法将单抗偶联到HRP上了,可以找找一些文献,不用20mg的,你可以根据投料比进行试验设计。

听实验室的说超滤管的效果不是很好,所以一直没用,你有没有做酶标抗体好的文献帮我推荐几篇啊?
3楼2012-04-08 20:57:44
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jfj_tj

木虫 (正式写手)

免疫学兴趣家

【答案】应助回帖

★ ★
telomerase: 金币+2, 谢谢你的热心应助!! 2012-04-10 13:15:35
超滤管难在对其分子量的摸索上,用好了,应该说效果还是比较好的。看你怎么运用就是。不知道怎么在小木虫上把文章给你,就把其中一篇的题目给你吧:Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables using monoclonal antibody-based direct competitive ELISA followed by HPLC–MS/MS,其中有一些这篇文章参考的文献也还行。希望对你有用

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Orbetterit,orenjoyit!
4楼2012-04-08 23:13:01
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