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714850835铁虫 (初入文坛)
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怎么分离抗体和与抗体连接好的材料
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| 将抗体与我们制备的材料（~50nm）用的EDC和NHS连接，最后怎样才能把没连上抗体的洗掉，得到比较纯的连接物呢？ the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min.The lower phase, contain-ing free QDs and isourea, were discarded. To wash the conju-gate and reduce the impurities, the upper phase, containing QD-IgG, was diluted by 300 L PBS buffer, and additionally subjected to centrifugation at 5000 rmp for 15 min. This washing step was repeated twice. The conjugate was recovered by 100 L of PBS and transferred to a new Eppendorf tube and then stored at 4 °C in a dark until use. 实验刚起步，觉得ODs-lgG的大小跟ODs的差不多耶，因该混在一起吧，不理解文献中的方法。谢谢各位师兄师姐指点~ |
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2楼2012-12-23 22:13:13
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【答案】应助回帖
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714850835: 金币+10, 博学EPI+1, ★★★★★最佳答案 2012-12-27 10:22:39
714850835: 金币+10, 博学EPI+1, ★★★★★最佳答案 2012-12-27 10:22:39
| 他们进行了超滤分离， "the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min" 也就是说用离心的方法，离心管是套式的（大离心管里面有小离心管，中间有滤膜的那种），这个跟做PCR之前的核酸提取方法差不多，标记好的QDs留在了上层里，free的滤到了下层（The lower phase, contain-ing free QDs and isourea, were discarded.）。 |
8楼2012-12-27 10:05:06
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9楼2012-12-27 10:23:59
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