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714850835

铁虫 (初入文坛)

[求助] 怎么分离抗体和与抗体连接好的材料

将抗体与我们制备的材料（~50nm）用的EDC和NHS连接，最后怎样才能把没连上抗体的洗掉，得到比较纯的连接物呢？ the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min.The lower phase, contain-ing free QDs and isourea,  were discarded. To wash the conju-gate and reduce the impurities, the upper phase, containing QD-IgG, was diluted by 300  L PBS buffer, and additionally subjected to centrifugation at 5000 rmp for 15 min. This washing step was repeated twice. The conjugate was recovered by 100 L of PBS and transferred to a new Eppendorf tube and then stored at 4 °C in a dark until use. 实验刚起步，觉得ODs-lgG的大小跟ODs的差不多耶，因该混在一起吧，不理解文献中的方法。谢谢各位师兄师姐指点~
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1楼 2012-12-23 20:05:25
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回帖置顶 ( 共有1个 )

abc5710110

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
714850835: 金币+10, 博学EPI+1, ★★★★★最佳答案 2012-12-27 10:22:39
他们进行了超滤分离， "the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min"  也就是说用离心的方法，离心管是套式的（大离心管里面有小离心管，中间有滤膜的那种），这个跟做PCR之前的核酸提取方法差不多，标记好的QDs留在了上层里，free的滤到了下层（The lower phase, contain-ing free QDs and isourea,  were discarded.）。
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8楼2012-12-27 10:05:06
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11jxli1

禁虫 (著名写手)
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2楼2012-12-23 22:13:13
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714850835

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 11jxli1 at 2012-12-23 22:13:13
采用专业的化学试剂可也分离

什么试剂呀?
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3楼2012-12-24 07:51:18
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abc5710110

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这个要看量子点的粒径大小和在溶液体系中的分散性如何了。
可以试试通过简单离心的方法，蛋白在溶液，4000~5000rpm的离心速度不容易离心下去，如果量子点能够离下去，就能分离开了，然后对离心物进行清洗几次，把结合不牢的洗去就OK了。
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4楼2012-12-24 09:24:00
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714850835

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by abc5710110 at 2012-12-24 09:24:00
这个要看量子点的粒径大小和在溶液体系中的分散性如何了。
可以试试通过简单离心的方法，蛋白在溶液，4000~5000rpm的离心速度不容易离心下去，如果量子点能够离下去，就能分离开了，然后对离心物进行清洗几次，把结 ...

谢谢啦^_^
QDs下去了，那么ODs-抗体的也会下去吧~这样怎么分离它们俩呢？
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5楼2012-12-24 13:26:42
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abc5710110

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 714850835 at 2012-12-24 13:26:42
谢谢啦^_^
QDs下去了，那么ODs-抗体的也会下去吧~这样怎么分离它们俩呢？...

额，如果比例合适的话，QDs表面基本上都标记了吧，不知道你还做不做封闭？
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6楼2012-12-25 14:20:39
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714850835

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by abc5710110 at 2012-12-25 14:20:39
额，如果比例合适的话，QDs表面基本上都标记了吧，不知道你还做不做封闭？...

我们不是用的QDs，是用的上转换连的是氨基，原理差不多嘛。不懂文献那种方法是怎么分离滴。
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7楼2012-12-26 19:21:32
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714850835

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by abc5710110 at 2012-12-27 10:05:06
他们进行了超滤分离， "the free non-conjugated QDs and byproduct isourea were removed by ultrafiltration using 100 K Nanosep centrifugal devices by centrifugation at 5000 rmp for 15 min"  也 ...

谢谢啦！刚开始做实验还不知道这么高级的方法。
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9楼2012-12-27 10:23:59
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