应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 定点突变，请教
51/1返回列表
查看: 1449  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yulou2199

新虫 (小有名气)

[求助] 定点突变，请教

目的基因重组于PHEN 1载体，想对其中的几个位点进行定点饱和突变，通过设计一对互补引物，利用全质粒PCR+dpn 1消化能否实现，试剂盒一般用哪个公司？（实惠点的）
下面是我设计的针对其中一个位点的突变引物，是否可行？
5‘ CGCTTACGGCTTCTTTNNNTACTGGGGCCAAGG 3’
3‘ GCGAATGCCGAAGAAANNNATGACCCCGGTTCC 5’
DNASTAR引物分析：Length: 33, Tm: 73.8, GC%: 60.6
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-12-13 10:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

escapezrj

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
当时我做的时候也是用的试剂盒，感觉蛮轻松愉快的，按着protocol，然后一做就成功啦。
赞一下 回复此楼
5楼2012-12-13 19:43:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-12-13 19:53:41
最好是引物上设计好酶切位点，以质粒为模板定点突变只扩增目的片段，然后再从新连接载体上。聚合酶用高保真的
赞一下 回复此楼
加油
2楼2012-12-13 13:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励发帖交流问题。 2012-12-13 19:53:49
amisking: 回帖置顶 2012-12-13 19:53:53
楼主是不是用的点突变试剂盒，里面有一个公式的，按照那个公式算>78度就可以，但是那个公式里面不配对的碱基是减的。

条件允许，买试剂盒做，条件不允许，自己买pfu, dpnI.

试剂盒Stratagene最先研发的，现在好像被安捷伦收购了，国内以前有个公司做过，就不在这里做广告了。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
3楼2012-12-13 14:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yulou2199

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pennchem at 2012-12-13 14:32:28
楼主是不是用的点突变试剂盒，里面有一个公式的，按照那个公式算>78度就可以，但是那个公式里面不配对的碱基是减的。

条件允许，买试剂盒做，条件不允许，自己买pfu, dpnI.

试剂盒Stratagene最先研发的，现 ...

是的，准备用定点突变试剂盒，在stratagene网站上设计得到的引物是：
5'-cttatttctgcgcttacggcttctttnnntactggggccaaggg-3'
3'-gaataaagacgcgaatgccgaagaaannnatgaccccggttccc-5'
Length (nt.)          Tm        Duplex Energy at 65°C        Energy Cost of Mismatches
44        78.91°C        -55.71 kcal/mole        9.1%

44bp是不是又点长，Tm>78是不是必须条件？请指教
赞一下 回复此楼
4楼2012-12-13 17:32:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！ 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[基金申请] 情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？ +4 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-15 22:28 by baiboxie
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭