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关于定点突变的问题
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lingxingcao
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[交流]
关于定点突变的问题
我要把K突变成A，买了突变试剂盒，我是严格按照说明书上的做的，做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度，引物设计，PCR条件，Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊，怎么不出结果呢。
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2011-08-04 14:53:24
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cloverplm
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★
lingxingcao(金币
+1
):谢谢参与
你可以分析下K突变为A，选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出，就选择给公司去做突变，除了定点突变，还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。
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2楼
2011-08-04 22:33:20
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空谷幽风
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lingxingcao(金币
+1
):谢谢参与
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2楼
:
Originally posted by
cloverplm
at 2011-08-04 22:33:20:
你可以分析下K突变为A，选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出，就选择给公司去做突变，除了定点突变，还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。
分析的很正确，公司特别喜欢做定点突变这样的单子，利润相当大，分析一下自己设两套引物能不能搞定，定点突变是很简单的一个实验
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3楼
2011-08-04 23:24:44
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longage.gene
银虫
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):谢谢参与
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1楼
:
Originally posted by
lingxingcao
at 2011-08-04 14:53:24:
我要把K突变成A，买了突变试剂盒，我是严格按照说明书上的做的，做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度，引物设计，PCR条件，Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊，怎么不出结果呢。
请详细说明过程才能帮你分析到底那一步可能有问题。
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4楼
2011-08-05 10:33:21
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roomofxw
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lingxingcao(金币
+1
):谢谢参与
使用overlap PCR，引物悬挂出来一段，覆盖你所要突变的位置。
拼接后的序列，就是你突变后的序列。
这种方法成功率挺高的，虽然麻烦点
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5楼
2011-08-05 10:43:56
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quiller2000
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lingxingcao(金币
+1
):谢谢参与
用个质粒做，很容易啊，呵呵
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6楼
2011-08-05 21:52:37
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qiuyu618
7楼
2012-03-30 16:08
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