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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lingxingcao

新虫 (小有名气)


[交流] 关于定点突变的问题

我要把K突变成A,买了突变试剂盒,我是严格按照说明书上的做的,做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度,引物设计,PCR条件,Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊,怎么不出结果呢。
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cloverplm

金虫 (小有名气)



lingxingcao(金币+1):谢谢参与
你可以分析下K突变为A,选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出,就选择给公司去做突变,除了定点突变,还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。
2楼2011-08-04 22:33:20
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lingxingcao(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by cloverplm at 2011-08-04 22:33:20:
你可以分析下K突变为A,选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出,就选择给公司去做突变,除了定点突变,还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。

分析的很正确,公司特别喜欢做定点突变这样的单子,利润相当大,分析一下自己设两套引物能不能搞定,定点突变是很简单的一个实验
3楼2011-08-04 23:24:44
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longage.gene

银虫 (小有名气)



lingxingcao(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by lingxingcao at 2011-08-04 14:53:24:
我要把K突变成A,买了突变试剂盒,我是严格按照说明书上的做的,做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度,引物设计,PCR条件,Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊,怎么不出结果呢。

请详细说明过程才能帮你分析到底那一步可能有问题。
4楼2011-08-05 10:33:21
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lingxingcao(金币+1):谢谢参与
使用overlap PCR,引物悬挂出来一段,覆盖你所要突变的位置。
拼接后的序列,就是你突变后的序列。
这种方法成功率挺高的,虽然麻烦点
5楼2011-08-05 10:43:56
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lingxingcao(金币+1):谢谢参与
用个质粒做,很容易啊,呵呵
6楼2011-08-05 21:52:37
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简单回复
qiuyu6187楼
2012-03-30 16:08   回复  
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