应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于定点突变的问题
51/1返回列表
查看: 1606  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lingxingcao

新虫 (小有名气)

[交流] 关于定点突变的问题

我要把K突变成A，买了突变试剂盒，我是严格按照说明书上的做的，做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度，引物设计，PCR条件，Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊，怎么不出结果呢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2011-08-04 14:53:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
使用overlap PCR，引物悬挂出来一段，覆盖你所要突变的位置。
拼接后的序列，就是你突变后的序列。
这种方法成功率挺高的，虽然麻烦点
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-08-05 10:43:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cloverplm

金虫 (小有名气)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
你可以分析下K突变为A，选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出，就选择给公司去做突变，除了定点突变，还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-04 22:33:20
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by cloverplm at 2011-08-04 22:33:20:
你可以分析下K突变为A，选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出，就选择给公司去做突变，除了定点突变，还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。

分析的很正确，公司特别喜欢做定点突变这样的单子，利润相当大，分析一下自己设两套引物能不能搞定，定点突变是很简单的一个实验
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-04 23:24:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longage.gene

银虫 (小有名气)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by lingxingcao at 2011-08-04 14:53:24:
我要把K突变成A，买了突变试剂盒，我是严格按照说明书上的做的，做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度，引物设计，PCR条件，Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊，怎么不出结果呢。

请详细说明过程才能帮你分析到底那一步可能有问题。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-05 10:33:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭