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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于定点突变的问题
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lingxingcao

新虫 (小有名气)

[交流] 关于定点突变的问题

我要把K突变成A，买了突变试剂盒，我是严格按照说明书上的做的，做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度，引物设计，PCR条件，Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊，怎么不出结果呢。
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1楼 2011-08-04 14:53:24
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by cloverplm at 2011-08-04 22:33:20:
你可以分析下K突变为A，选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出，就选择给公司去做突变，除了定点突变，还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。

分析的很正确，公司特别喜欢做定点突变这样的单子，利润相当大，分析一下自己设两套引物能不能搞定，定点突变是很简单的一个实验
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3楼2011-08-04 23:24:44
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cloverplm

金虫 (小有名气)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
你可以分析下K突变为A，选用哪个密码子更优先。实在用试剂盒突变不出，就选择给公司去做突变，除了定点突变，还可以用基因合成的方式帮你构建突变质粒。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-04 22:33:20
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longage.gene

银虫 (小有名气)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
1楼: Originally posted by lingxingcao at 2011-08-04 14:53:24:
我要把K突变成A，买了突变试剂盒，我是严格按照说明书上的做的，做了4次了还没有得到突变质粒。模板浓度，引物设计，PCR条件，Mutazme处理时间都是按照说明书上做的啊，怎么不出结果呢。

请详细说明过程才能帮你分析到底那一步可能有问题。
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4楼2011-08-05 10:33:21
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★
lingxingcao(金币+1):谢谢参与
使用overlap PCR，引物悬挂出来一段，覆盖你所要突变的位置。
拼接后的序列，就是你突变后的序列。
这种方法成功率挺高的，虽然麻烦点
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5楼2011-08-05 10:43:56
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