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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 敲除基因后不稳定
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望海思月

铜虫 (小有名气)

[求助] 敲除基因后不稳定

在大肠杆菌内敲除了4个基因后，测量我的目的产物得到明显的提高了。-70度保藏了一段时间后再将该菌拿出来摇瓶发酵后，测量目的产物相较第一次明显的下降了，再重复做了几次，都是产量一次比一次低，验证该菌，4个基因确实已经敲除了。请问是什么原因？？能不能有方法使该菌回到第一次的产量？？
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1楼 2012-12-11 14:55:41
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个应该是你菌株保藏过程中活性下降了吧，你试着多活化一次，另外种子质量对发酵有一定的影响，还有就是你的菌株可能退化了，你分一下纯看看。
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2楼2012-12-12 08:35:38
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望海思月

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanhua_2006 at 2012-12-12 08:35:38
这个应该是你菌株保藏过程中活性下降了吧，你试着多活化一次，另外种子质量对发酵有一定的影响，还有就是你的菌株可能退化了，你分一下纯看看。

菌株退化了怎么分纯，就是平板划线，挑单菌落吗？试过了啊
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3楼2012-12-12 11:17:29
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望海思月

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanhua_2006 at 2012-12-12 08:35:38
这个应该是你菌株保藏过程中活性下降了吧，你试着多活化一次，另外种子质量对发酵有一定的影响，还有就是你的菌株可能退化了，你分一下纯看看。

菌株退化了，怎么分纯？？就是平板划线挑单菌落吗？？已经试过了啊，还有什么可能？？
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4楼2012-12-12 11:19:47
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yanhua_2006

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
望海思月: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-12-13 15:45:56
引用回帖:
4楼: Originally posted by 望海思月 at 2012-12-12 11:19:47
菌株退化了，怎么分纯？？就是平板划线挑单菌落吗？？已经试过了啊，还有什么可能？？...

你试试分纯用液体培养基，在稀释涂布之前用玻璃珠适当摇10分钟，这样效果可能比划线分纯效果好一些
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5楼2012-12-13 08:59:46
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