| 查看: 1499 | 回复: 4 | |||
youngsun50木虫 (正式写手)
|
[求助]
细菌膜蛋白提取后复溶？
|
|
各位虫友，我提取的是G-细菌膜蛋白，用的是超速离心的方法，具体如下： 1. 100ml过夜培养菌液，离心洗涤，后2ml生理盐水重悬； 2. 超声破碎后，5000g,20min去除未破壁细胞； 3. 100,000g,4度离心1h； 4. 沉淀用3ml含2%SLS的生理盐水重悬，室温放置30min后用枪头轻轻吹打使之溶解；100,000g,4度离心1h； 5. 重复步骤4一次； 6. 用200ul蒸馏水溶解沉淀。 结果加入蒸馏水后沉淀不能溶液，过夜也不行，加入了2%SDS后，50度复溶也不行。试了2%triton-100也不行。 请问，有遇到这种情况的吗，怎么解决啊？ 谢谢了  |
回复此楼» 猜你喜欢
求调剂
已经有3人回复
-
265求调剂
已经有4人回复
-
085700资源与环境308求调剂
已经有6人回复
-
一志愿吉林大学材料学硕321求调剂
已经有12人回复
-
286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有5人回复
-
申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复
已经有4人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有5人回复
-
一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂
已经有6人回复
-
081700化工学硕调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细菌10^6 离心为何无法收集
已经有7人回复
- 动物细胞膜蛋白提取试剂盒
已经有5人回复
- 关于丙酮提取酚类物质时遇到的问题
已经有5人回复
- 请问细胞膜蛋白怎么提取，目的蛋白分子量170kD
已经有10人回复
- 为什么细菌基因组提取出来总是23K？
已经有8人回复
- 提取好的细菌DNA溶解在TE里面好还是溶解在超纯水里好？
已经有9人回复
- Triton X-114法提取膜蛋白
已经有18人回复
- 求助从动物体提取某种特定蛋白的方法
已经有10人回复
- 细菌RNA提取如何配制TE 和溶菌酶
已经有6人回复
- 冻干制剂复溶后浊度不好？求大神解决。
已经有11人回复
- 如何提取细胞膜蛋白和细胞器蛋白
已经有3人回复
- 蛋白透析过程中出现浑浊
已经有18人回复
- 蛋白破碎后，上清的活性很低
已经有24人回复
- 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
已经有4人回复
- 组织和细胞中，膜蛋白，胞浆蛋白，核蛋白提取裂解液区别
已经有5人回复
- 提取细菌DNA的时候用反复煮沸+冻融的方法可行吗？
已经有4人回复
- 请教：用天根细菌基因组提取试剂盒，最后得到的DNA溶液有白色沉淀
已经有4人回复
- 细菌RNA提取后跑电泳出现一条暗带和在泳道中弥散都是什么原因？
已经有9人回复
- 膜蛋白提取问题！
已经有8人回复
- 蛋白沉淀后不能复溶~！
已经有7人回复
2楼2013-05-02 09:07:52
youngsun50
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2640.6
- 散金: 340
- 红花: 1
- 帖子: 472
- 在线: 275.1小时
- 虫号: 852073
- 注册: 2009-09-20
- 专业: 系统生物学
|
我的操作过程： 100ml过夜培养的细菌，经离心收集，并用Tris-Mg 缓冲液[10mM Tris-Cl (pH 7.3)，5mM MgCl2]洗涤，后重悬于3ml Tris-Mg 缓冲液中。冰浴超声破碎菌体，6000g，10min离心收集上清液，弃去未破碎细菌，上清液4 ℃ 100,000g 离心lh，收集沉淀。用5ml含2％的十二烷基肌氨酸钠（SLS）的Tris-Mg 缓冲液重悬沉淀物，室温温育20-30min，100,000g 室温离心lh，收集沉淀，重复该步骤一次，最后得到的沉淀（即为外膜蛋白）用100~200ul TES缓冲液[10mM Tris-Cl (pH 7.3)，5mM乙二胺四乙酸（EDTA）, 2%十二烷基磺酸钠（SDS）]溶解。 TES溶解蛋白效果好一些，但冻存复溶时还是有沉淀，但我觉得对定性没影响。对于你的冷冻菌体提取，我一般也收集完菌体，冻与-20或-70，第二天再进行下一步，没啥影响。不知冻的时间长了对外膜蛋白分离有啥影响？ |
3楼2013-05-03 16:40:38
4楼2013-05-04 11:20:57
youngsun50
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2640.6
- 散金: 340
- 红花: 1
- 帖子: 472
- 在线: 275.1小时
- 虫号: 852073
- 注册: 2009-09-20
- 专业: 系统生物学
5楼2013-05-04 11:58:16
