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zdx516铁虫 (小有名气)
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[求助]
求助：本人准备做一个细菌中某个基因的敲除，想用同源重组的方法做
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本人想要对细菌的某个基因，进行基因敲除，用同源重组的方法，以接合的方式转化，初次接触，都不懂，请问有做过的大侠么，具体程序，步骤是啥呀， 万分感谢呀 |
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【答案】应助回帖
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基本设计方法来自Church 1997年的文章 Methods for Generating Precise Deletions and Insertions in the Genome of Wild-Type Escherichia coli: Application to Open Reading Frame Characterization 在其他细菌里，你还需要保证有重组酶，一个反向选择基因可用（sacB在一般Gram-里面都可以），最好有一个在你目标菌中的自杀质粒，一个可以筛选区分e. coli和你的目的菌的办法, 比如某种抗生素能杀e. coli 杀不了你的目标菌 有一个shewanella的protocol，其他也没啥大区别，方法都是一样的 PROTOCOL FOR IN-FRAME DELETION MUTAGENESIS |
3楼2013-02-20 22:31:23