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简单HE认真

木虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化中再生后柱子变白,什么问题?

各位虫友,最近小的在做蛋白纯化实验中,新柱子用完一遍后,冲洗2MNaCl(pH5.5)5-10ml,PBS(pH8.0)10ml,之后柱子基本上就变白啦,然后就不怎么挂蛋白啦,这样就不能重复利用啦,不知道是什么问题,有没有可能是试剂或者pH什么的出了问题,上样缓冲液是8M尿素,请各位帮忙解答(有什么我没说清楚的还可以要求再补充),谢谢!
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简单做人,认真做事。
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
变白了说明洗干净了啊~Ni柱洗完后,每次用之前是得再用硫酸镍溶液再挂一次镍啊,说明书上写了的啊~你这镍柱有绿色才说明上面有镍的才可以结合蛋白
5楼2012-12-01 13:21:17
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CharityZhou

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这种情况我遇到过啊,说明书也会有的,你的镍离子被螯合掉 了,加点硫酸镍溶液啊,这样才能重生的。
生命不息,战斗不止
17楼2012-12-04 10:09:42
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普通回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是由于Ni-NTA脱落引起的
静心做事。
2楼2012-11-30 20:27:12
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

再生下应该可以用的
静心做事。
3楼2012-11-30 20:30:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
再生柱子是用乙醇洗的。如果实在不干净可以用SDS去掉Ni2+, 然后重新上镍,就可以用了。你的柱子是镍掉了,洗干净重装就可以了。
4楼2012-12-01 08:36:54
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:36:54
再生柱子是用乙醇洗的。如果实在不干净可以用SDS去掉Ni2+, 然后重新上镍,就可以用了。你的柱子是镍掉了,洗干净重装就可以了。

没这麽简单吧,我们实验室重生过的镍柱基本都不怎么好用的,而且我的柱子就用过一次,这样就重生也太不实用了吧,又不经济,呵呵!
简单做人,认真做事。
6楼2012-12-01 21:21:27
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-12-01 13:21:17
变白了说明洗干净了啊~Ni柱洗完后,每次用之前是得再用硫酸镍溶液再挂一次镍啊,说明书上写了的啊~你这镍柱有绿色才说明上面有镍的才可以结合蛋白

正常情况下,洗一次是不会变白的啊,一般我们是重复利用10-15次以上的,这次不知是什么情况哈
简单做人,认真做事。
7楼2012-12-01 21:24:21
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-11-30 20:27:12
一般是由于Ni-NTA脱落引起的

怎么才用一次,镍就脱落这麽严重呢?帮我分析一下可能的原因好吗,谢啦!
简单做人,认真做事。
8楼2012-12-01 21:25:56
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
很正常的现象
Ni离子脱落
直接上点Ni溶液,基本上可以再使用。
9楼2012-12-01 22:20:36
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 简单HE认真 at 2012-12-01 21:25:56
怎么才用一次,镍就脱落这麽严重呢?帮我分析一下可能的原因好吗,谢啦!...

你的溶液中是不是EDTA之类的螯合剂?
静心做事。
10楼2012-12-01 22:57:40
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