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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？
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查看: 4817  |  回复: 22
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 简单HE认真 at 2012-12-01 21:21:27
没这麽简单吧，我们实验室重生过的镍柱基本都不怎么好用的，而且我的柱子就用过一次，这样就重生也太不实用了吧，又不经济，呵呵！...

只用过一次就变白是不怎么正常，如果纯化同一蛋白通常只是洗一曦反复用很多次的。你确定不是用了什么不正确的溶液？
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11楼2012-12-02 03:29:33
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-12-01 22:57:40
你的溶液中是不是EDTA之类的螯合剂？...

没有的啊，就是8MU，磷酸盐，Tris-Hcl，没有EDTA的。
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简单做人，认真做事。
12楼2012-12-02 18:08:48
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是纯化包涵体吧？应该加了些还原剂吧?是不是加了DTT?
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13楼2012-12-02 20:45:58
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linzshit

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
貌似9楼正解，很有可能是被螯合下来了
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14楼2012-12-03 10:24:59
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qusongyuan

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:38:02
用EDTA确实可以将镍柱洗掉，很少即可。你的溶液中8M尿素及tris·cl，磷酸盐缓冲液没有问题的话，是不会洗掉Ni2+的。另外SDS似乎是不能洗掉Ni2+的，这点需要证实，本人做过似乎没事。可能你用的是TE缓冲液，TE里面的E是EDTA啊！！！！！！T是tris·cl。挂柱的步骤较多，这里不写了，如有需要请联系我。
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15楼2012-12-03 12:49:37
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lixin123qq

木虫 (小有名气)

小小博士

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-03 16:38:10
15喽分析的有道理， 你的方法洗过柱子后 ，需要用硫酸镍溶液（浓度一般为100mM，绿色溶液）,重新冲洗 ，挂镍，直到流川里变成浅绿色溶液。然后再拿dd水冲洗才能再用，然后用你的上样buffer，平衡，再上样。
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16楼2012-12-03 14:17:36
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CharityZhou

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这种情况我遇到过啊，说明书也会有的，你的镍离子被螯合掉 了，加点硫酸镍溶液啊，这样才能重生的。
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生命不息，战斗不止
17楼2012-12-04 10:09:42
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Dearstar

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们一般是用2-3次就再生的啊，同意再生重新加Ni试试看，没事的~~
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18楼2012-12-24 11:08:31
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atai5793

新虫 (初入文坛)
你问题解决了没有 我是用氢氧化钠浸泡 也是变白 不知道怎么回事？
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19楼2013-01-05 21:14:31
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

多数是由于你的样品溶液中含有螯和金属离子的试剂，导致Ni离子流失了。
如果你想简单的话，就可以直接，溶解点NiSO4，过次柱子，再用水清洗就可以用了。
（正常应该先将填料上可能有的Ni螯和掉，清洗一下填料，然后重新上ni溶液就行了）
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20楼2013-01-06 10:38:10
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