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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？

各位虫友，最近小的在做蛋白纯化实验中，新柱子用完一遍后，冲洗2MNaCl（pH5.5）5-10ml，PBS（pH8.0）10ml，之后柱子基本上就变白啦，然后就不怎么挂蛋白啦，这样就不能重复利用啦，不知道是什么问题，有没有可能是试剂或者pH什么的出了问题，上样缓冲液是8M尿素，请各位帮忙解答（有什么我没说清楚的还可以要求再补充），谢谢！
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简单做人，认真做事。
1楼 2012-11-30 19:26:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 简单HE认真 at 2012-12-01 21:21:27
没这麽简单吧，我们实验室重生过的镍柱基本都不怎么好用的，而且我的柱子就用过一次，这样就重生也太不实用了吧，又不经济，呵呵！...

只用过一次就变白是不怎么正常，如果纯化同一蛋白通常只是洗一曦反复用很多次的。你确定不是用了什么不正确的溶液？
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11楼2012-12-02 03:29:33
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是由于Ni-NTA脱落引起的
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静心做事。
2楼2012-11-30 20:27:12
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
再生下应该可以用的
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静心做事。
3楼2012-11-30 20:30:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
再生柱子是用乙醇洗的。如果实在不干净可以用SDS去掉Ni2+, 然后重新上镍，就可以用了。你的柱子是镍掉了，洗干净重装就可以了。
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4楼2012-12-01 08:36:54
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