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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？

各位虫友，最近小的在做蛋白纯化实验中，新柱子用完一遍后，冲洗2MNaCl（pH5.5）5-10ml，PBS（pH8.0）10ml，之后柱子基本上就变白啦，然后就不怎么挂蛋白啦，这样就不能重复利用啦，不知道是什么问题，有没有可能是试剂或者pH什么的出了问题，上样缓冲液是8M尿素，请各位帮忙解答（有什么我没说清楚的还可以要求再补充），谢谢！
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简单做人，认真做事。
1楼 2012-11-30 19:26:16
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
变白了说明洗干净了啊~Ni柱洗完后，每次用之前是得再用硫酸镍溶液再挂一次镍啊，说明书上写了的啊~你这镍柱有绿色才说明上面有镍的才可以结合蛋白
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5楼2012-12-01 13:21:17
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CharityZhou

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这种情况我遇到过啊，说明书也会有的，你的镍离子被螯合掉 了，加点硫酸镍溶液啊，这样才能重生的。
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生命不息，战斗不止
17楼2012-12-04 10:09:42
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普通回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是由于Ni-NTA脱落引起的
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静心做事。
2楼2012-11-30 20:27:12
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
再生下应该可以用的
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静心做事。
3楼2012-11-30 20:30:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
再生柱子是用乙醇洗的。如果实在不干净可以用SDS去掉Ni2+, 然后重新上镍，就可以用了。你的柱子是镍掉了，洗干净重装就可以了。
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4楼2012-12-01 08:36:54
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-01 08:36:54
再生柱子是用乙醇洗的。如果实在不干净可以用SDS去掉Ni2+, 然后重新上镍，就可以用了。你的柱子是镍掉了，洗干净重装就可以了。

没这麽简单吧，我们实验室重生过的镍柱基本都不怎么好用的，而且我的柱子就用过一次，这样就重生也太不实用了吧，又不经济，呵呵！
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简单做人，认真做事。
6楼2012-12-01 21:21:27
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weigh1111 at 2012-12-01 13:21:17
变白了说明洗干净了啊~Ni柱洗完后，每次用之前是得再用硫酸镍溶液再挂一次镍啊，说明书上写了的啊~你这镍柱有绿色才说明上面有镍的才可以结合蛋白

正常情况下，洗一次是不会变白的啊，一般我们是重复利用10-15次以上的，这次不知是什么情况哈
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简单做人，认真做事。
7楼2012-12-01 21:24:21
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简单HE认真

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2012-11-30 20:27:12
一般是由于Ni-NTA脱落引起的

怎么才用一次，镍就脱落这麽严重呢？帮我分析一下可能的原因好吗，谢啦！
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简单做人，认真做事。
8楼2012-12-01 21:25:56
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很正常的现象
Ni离子脱落
直接上点Ni溶液，基本上可以再使用。
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9楼2012-12-01 22:20:36
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jiangyhai

金虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 简单HE认真 at 2012-12-01 21:25:56
怎么才用一次，镍就脱落这麽严重呢？帮我分析一下可能的原因好吗，谢啦！...

你的溶液中是不是EDTA之类的螯合剂？
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静心做事。
10楼2012-12-01 22:57:40
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