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汕头大学海洋科学接受调剂
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简单HE认真

木虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化中再生后柱子变白,什么问题?

各位虫友,最近小的在做蛋白纯化实验中,新柱子用完一遍后,冲洗2MNaCl(pH5.5)5-10ml,PBS(pH8.0)10ml,之后柱子基本上就变白啦,然后就不怎么挂蛋白啦,这样就不能重复利用啦,不知道是什么问题,有没有可能是试剂或者pH什么的出了问题,上样缓冲液是8M尿素,请各位帮忙解答(有什么我没说清楚的还可以要求再补充),谢谢!
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简单做人,认真做事。
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lixin123qq

木虫 (小有名气)

小小博士

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-03 16:38:10
15喽分析的有道理, 你的方法洗过柱子后 ,需要用硫酸镍溶液(浓度一般为100mM,绿色溶液),重新冲洗 ,挂镍,直到流川里变成浅绿色溶液。然后再拿dd水冲洗才能再用,然后用你的上样buffer,平衡,再上样。
16楼2012-12-03 14:17:36
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是由于Ni-NTA脱落引起的
静心做事。
2楼2012-11-30 20:27:12
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

再生下应该可以用的
静心做事。
3楼2012-11-30 20:30:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
再生柱子是用乙醇洗的。如果实在不干净可以用SDS去掉Ni2+, 然后重新上镍,就可以用了。你的柱子是镍掉了,洗干净重装就可以了。
4楼2012-12-01 08:36:54
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