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zhywancx

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[求助] 荧光定量内参基因引物的设计

最近要做小麦的荧光定量，内参基因是不是选择β-actin啊？还有内参引物是自己设计还是怎么着啊？有没有人设计好的，做荧光定量比较好的？

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1楼 2012-11-23 11:49:47

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涌动的泉

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zhywancx: 回帖置顶 2012-11-26 11:12:56

可以用做你那个品种小麦的文章里的β-actin引物，多找几对，跑个预实验看哪对跟你设的基因引物退火温度相近就用哪对

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zhywancx

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2楼2012-11-23 15:01:47

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zhywancx: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-11-23 16:37:02

有现成的，不用自己设计，不过也可以从文章里找找

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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3楼2012-11-23 16:10:39

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jl860822

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可以用别人设计好的，这个没问题的

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4楼2012-11-26 09:00:22

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zhywancx

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 涌动的泉 at 2012-11-23 15:01:47
可以用做你那个品种小麦的文章里的β-actin引物，多找几对，跑个预实验看哪对跟你设的基因引物退火温度相近就用哪对

内参引物和目的基因引物的Tm值差了5-6度，能用吗？

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5楼2012-11-26 11:12:34

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涌动的泉

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看天: 金币+2, 鼓励常来 2012-11-26 12:20:12

引用回帖:

5楼: Originally posted by zhywancx at 2012-11-26 11:12:34
内参引物和目的基因引物的Tm值差了5-6度，能用吗？...

应该没问题的，你可以在荧光PCR仪里跑个梯度看看，确定最佳退火温度

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我们的过去，成就了如今的我们，无需悔恨

6楼2012-11-26 12:00:53

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jxySapphire

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4楼: Originally posted by jl860822 at 2012-11-26 09:00:22
可以用别人设计好的，这个没问题的

想问一下：从网上找到的内参引物，和目的基因的种属以及测目的基因常用的那种内参就行吗？现在自己设计也无从下手。所有的内参是不只要种属和自己的目的基因一致就行？

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7楼2013-06-29 11:02:37

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