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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 简并引物扩增失败
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greenhope3371

铜虫 (正式写手)

[求助] 简并引物扩增失败

根据近源种序列用设计的简并引物扩增失败（前四道），但直接拿近源种内参基因非简并引物扩增成功，大小也对（五六道）。我的简并引物设计64度，实际58度P，手工设计的与软件设计的都没出带，请大家帮忙分析下原因

IMG_20121120_175116.jpg
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努力
1楼 2012-11-20 18:15:49
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
greenhope3371: 金币+2 2012-12-05 18:30:38
做兼并引物的话，退火温度比较重要
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4楼2012-11-21 12:14:37
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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greenhope3371: 金币+1, ★有帮助 2012-11-21 10:26:32
greenhope3371: 金币+2 2012-12-05 18:30:27
我觉得退火温度偏高，简并引物一般较短，你摸一下退火温度试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-11-20 20:40:03
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gdj363702043

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
greenhope3371: 金币+1, ★有帮助 2012-11-21 10:26:42
greenhope3371: 金币+2 2012-12-05 18:30:33
我觉得这不一定是引物问题  有可能是你源头有问题就是你提的dna或者rna纯度 和降解度
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加油努力
3楼2012-11-21 09:50:55
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hch123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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greenhope3371: 金币+2 2012-12-05 18:30:44
关键是退火啊！一般都比较高的！
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
5楼2012-11-21 19:16:07
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