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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体溶解问题
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红虫梦

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体溶解问题

各位：包涵体用8M urea溶解，溶解离心之后完全不能过0.45um的滤膜，所以我觉得大部分没有溶解，而是形成了很小的颗粒。不知道有什么方法能够提高其溶解度。谢谢各位的指教！
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梦想
1楼2012-11-14 15:20:00
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lioboo

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-11-15 10:32:26
我在里面加了0.2M tris，还有5mM的巯基乙醇。我这边没有强剪切搅拌头。以前我用超声辅助溶解，但是看了很多文献从来就没有用超声的，所以就感觉是不是超声对蛋白有影响或者也不能溶解蛋白，只是形成了肉眼看不到的 ...

超声应该不行吧，应该用搅拌
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死生挈阔与子同悦，执子之手与子偕老
4楼2012-11-15 20:26:31
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lioboo

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-11-17 10:01:21
除尿素之外再加0.06m/l tris缓冲液，7.5mm/lEDTA和1mm/lDTT，混合溶液用强剪切搅拌头搅拌
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死生挈阔与子同悦，执子之手与子偕老
2楼2012-11-14 22:04:33
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红虫梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lioboo at 2012-11-14 22:04:33
除尿素之外再加0.06m/l tris缓冲液，7.5mm/lEDTA和1mm/lDTT，混合溶液用强剪切搅拌头搅拌

我在里面加了0.2M tris，还有5mM的巯基乙醇。我这边没有强剪切搅拌头。以前我用超声辅助溶解，但是看了很多文献从来就没有用超声的，所以就感觉是不是超声对蛋白有影响或者也不能溶解蛋白，只是形成了肉眼看不到的小颗粒？谢谢！
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梦想
3楼2012-11-15 10:32:26
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-11-17 10:01:33
1949stone: 金币+2, 不错 2012-11-17 10:01:40
脲素溶解的样品过膜过不动是正常的，因为里面有很多杂质，有不溶解的蛋白和缓冲液的杂质。
1.你可以先离心，10000-12000rpm*10min，然后再过膜就好多了。
2.如果使用超声助溶，会使更多的目的蛋白和杂蛋白都溶解出来，对你后续纯化不利。
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5楼2012-11-16 10:31:46
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