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kaola714417

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】求助包涵体问题已有2人参与

我的包涵体蛋白用尿素变性溶解后，经过PH=8的lysis buffer透析后，想要上柱纯化，可是在透析后，经变性溶解的蛋白又沉淀出来，无法上柱纯化，请问高人这是什么原因？怎么解决？

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1楼 2010-11-11 18:40:38

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11wl11

新虫 (初入文坛)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):good！ 2010-11-11 21:46:24

尿素溶解的蛋白为变性蛋白，也就类似于直链状态，没有三维结构，而你透析除尿素，就是在做复性，也就是蛋白质自己折叠，回复活性，当然也有自己折叠叠错了的，也就是没有回复到自然构象上去的蛋白（无活性），而其一般来说这样的蛋白占了绝大数，一般复习成功的得率也就40%，所以LZ的蛋白几乎都是沉淀，所以建议LZ先做复性优化，选好条件再优化，具体的可以上网看看，有很多资料的。