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kaola714417

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助包涵体问题已有2人参与

我的包涵体蛋白用尿素变性溶解后,经过PH=8的lysis buffer透析后,想要上柱纯化,可是在透析后,经变性溶解的蛋白又沉淀出来,无法上柱纯化,请问高人这是什么原因?怎么解决?
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11wl11

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):good! 2010-11-11 21:46:24
尿素溶解的蛋白为变性蛋白,也就类似于直链状态,没有三维结构,而你透析除尿素,就是在做复性,也就是蛋白质自己折叠,回复活性,当然也有自己折叠叠错了的,也就是没有回复到自然构象上去的蛋白(无活性),而其一般来说这样的蛋白占了绝大数,一般复习成功的得率也就40%,所以LZ的蛋白几乎都是沉淀,所以建议LZ先做复性优化,选好条件再优化,具体的可以上网看看,有很多资料的。
2楼2010-11-11 20:22:26
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kaola714417

新虫 (初入文坛)

多谢了!O(∩_∩)O~
3楼2010-11-12 18:31:58
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