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axiye新虫 (小有名气)
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[求助]
real time PCR NTC 阳性扩增
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| 最近在做real time PCR实验，突然有一次发现用模板10倍稀释所做的标准曲线完全不标准，后来发现无模板对照也有阳性扩增，拿回来跑胶发现是目的片段，切胶回收测序也没有问题，有没有兄弟姐妹遇到过这种问题啊，都是怎么解决的呢？做了快一个月了，仍找不到具体原因，希望高手能够解答！ |
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3楼2012-10-30 20:13:08
zhwenxing
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尛森蟲
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【答案】应助回帖
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axiye: 金币+10, ★有帮助 2013-02-25 13:42:19
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axiye: 金币+10, ★有帮助 2013-02-25 13:42:19
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1、楼主的问题其实挺笼统的，N有条带，还是目的片段，说明模板混入了哈，气溶胶？用的枪吸入污染？都有可能 2、稀释10倍跑的不准，注意稀释液和稀释倍数的准确性 3、跑一下内参，看看是技术操作问题，还是PCR体系问题。 4、除了问题，重复两次后仍然有同样的问题，就先停止试验，好好去查查文献。注意，Qpcr的移液器我们都是单独使用的！包括加内参的、N的都是单独用！一般是先配出N来！ |
2楼2012-10-30 15:29:49
blackrose8089
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4楼2012-10-30 20:16:55
axiye
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5楼2012-10-30 21:24:49
10