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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样扩增新的基因完整片段
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wangds

金虫 (正式写手)

[交流] 怎样扩增新的基因完整片段

最近利用简并引物扩增出一段功能基因，与参考基因的同源性约87%，请问要扩增两端的序列怎么做，是用gene walking还是反向PCR？求高手指教
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1楼 2012-10-26 09:05:56
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wangds

金虫 (正式写手)
基因是从是细菌获得的
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2楼2012-10-26 09:08:08
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aloon111

金虫 (正式写手)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
可以做race
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3楼2012-10-26 10:31:40
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srtong

新虫 (小有名气)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
gene walking需要知道sequence。
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18楼2012-10-26 14:05:21
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wangds

金虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by srtong at 2012-10-26 14:05:21
gene walking需要知道sequence。

我已经扩增了一部分，在NCBI上比对了，87%相似，下面该怎么做啊？求教！
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21楼2012-10-26 14:49:45
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shine栗宁

新虫 (初入文坛)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
难……
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22楼2012-10-26 14:51:42
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
25楼2012-10-26 21:39:18
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
如果是细菌，用genome walking容易些，没有必要用RACE，太麻烦。
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26楼2012-10-27 01:41:01
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
根据你扩的序列设计特异引物，和genomewalking试剂盒的引物配对扩已知序列两端的未知序列。
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27楼2012-10-27 01:43:42
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
过来学习一下，呵呵
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29楼2012-10-27 19:56:09
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王文钊-

木虫 (小有名气)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
做RACE试试，根据你已知的那段序列分别设3'5'引物，扩完了再拼接
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30楼2012-10-28 12:44:42
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
gene walking 和反向PCR都可以
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31楼2012-10-28 12:55:55
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
race应该是比较好的方法吧
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32楼2012-10-28 19:23:33
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yinn

新虫 (初入文坛)
★
wangds(金币+1): 谢谢参与
情况跟你差不多，我做的反向PCR，做出了已知序列的后一半，还差前一半
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33楼2014-05-16 17:10:21
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blackdogzmz4楼
2012-10-26 10:48   回复  
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hofo3366995楼
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lhk-236楼
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偶尔呆7楼
2012-10-26 11:53   回复  
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hj8905098楼
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shannon20109楼
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sxmai8910楼
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JIA-qiqi11楼
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cl1985312楼
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