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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wangds

金虫 (正式写手)


[交流] 怎样扩增新的基因完整片段

最近利用简并引物扩增出一段功能基因,与参考基因的同源性约87%,请问要扩增两端的序列怎么做,是用gene walking还是反向PCR?求高手指教
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wangds

金虫 (正式写手)


基因是从是细菌获得的
2楼2012-10-26 09:08:08
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aloon111

金虫 (正式写手)



wangds(金币+1): 谢谢参与
可以做race
3楼2012-10-26 10:31:40
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srtong

新虫 (小有名气)



wangds(金币+1): 谢谢参与
gene walking需要知道sequence。
18楼2012-10-26 14:05:21
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wangds

金虫 (正式写手)


引用回帖:
18楼: Originally posted by srtong at 2012-10-26 14:05:21
gene walking需要知道sequence。

我已经扩增了一部分,在NCBI上比对了,87%相似,下面该怎么做啊?求教!
21楼2012-10-26 14:49:45
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shine栗宁

新虫 (初入文坛)



wangds(金币+1): 谢谢参与
难……
22楼2012-10-26 14:51:42
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匿名

用户注销 (正式写手)



wangds(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
25楼2012-10-26 21:39:18
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)



wangds(金币+1): 谢谢参与
如果是细菌,用genome walking容易些,没有必要用RACE,太麻烦。
26楼2012-10-27 01:41:01
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


根据你扩的序列设计特异引物,和genomewalking试剂盒的引物配对扩已知序列两端的未知序列。
27楼2012-10-27 01:43:42
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)



wangds(金币+1): 谢谢参与
过来学习一下,呵呵
29楼2012-10-27 19:56:09
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王文钊-

木虫 (小有名气)



wangds(金币+1): 谢谢参与
做RACE试试,根据你已知的那段序列分别设3'5'引物,扩完了再拼接
30楼2012-10-28 12:44:42
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wangds(金币+1): 谢谢参与
gene walking 和反向PCR都可以
31楼2012-10-28 12:55:55
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)



wangds(金币+1): 谢谢参与
race应该是比较好的方法吧
32楼2012-10-28 19:23:33
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yinn

新虫 (初入文坛)



wangds(金币+1): 谢谢参与
情况跟你差不多,我做的反向PCR,做出了已知序列的后一半,还差前一半
33楼2014-05-16 17:10:21
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简单回复
2012-10-26 10:48   回复  
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2012-10-26 11:39   回复  
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lhk-236楼
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偶尔呆7楼
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