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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 求助-4Kb的基因P不出来

有一个4Kb的基因,我需要把它P出来然后够载体,用cDNA二链为模板,混合酶、rTaq、LA Taq、pfu等酶都试过了,退火温度也做过梯度,还有,分成两段进行拼接的方法也用过,都是P不出来。请各位大虾指点一二,不甚感激!!

[ Last edited by 1949stone on 2012-10-23 at 07:50 ]
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太阳出来,星星要走。
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昺昺

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 植物园园长 at 2012-10-18 16:18:25
人基因组和cDNA扩增到6kb都很亮,另外,延伸30sec/kb,保真度是pfu的8倍。

好的,多谢!我试一下。
太阳出来,星星要走。
10楼2012-10-18 16:57:35
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果基因片段过大的话,建议分成几段P,然后拼接!
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-10-18 10:17:59
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hj890509

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
昺昺: 金币+3, 有帮助 2012-10-18 10:55:04
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-18 18:53:37
我们实验室也做一个基因大概4.7kb,刚开始P不出来,后来分成了四段分别P出来后拼接,现在已经做成功了,多试试
3楼2012-10-18 10:45:26
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昺昺

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hj890509 at 2012-10-18 10:45:26
我们实验室也做一个基因大概4.7kb,刚开始P不出来,后来分成了四段分别P出来后拼接,现在已经做成功了,多试试

谢谢指点!那我分成三段也试过,还有,你在做拼接过程中,那些需要特别注意的,比如引物、PCR程序、扩增长度啊等等,我拼接的时候有两段都是1Kb左右,也是照样P不出来
太阳出来,星星要走。
4楼2012-10-18 10:57:56
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