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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么我的maker总是不清晰
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼

[求助] 为什么我的maker总是不清晰

如题，请高手们指导，
我用的TAKARA公司的DL500 DNA Maker，3%琼脂糖凝胶，Tiandz 耐热型SYBR染料3ul，100V，40min，跑出来的MAKER很不清晰，为什么呢？

maker不清晰.jpg



2.jpg
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一辈子不长，对自己好点
1楼 2012-10-17 22:45:05
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼
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3楼: Originally posted by royxueli at 2012-10-18 00:46:42
不光ladder，你所有条带都是波浪状的。。煮胶的时候是不是完全均匀了呢。。里面一定不能有固体的东西。。

中火煮了2min
那我今天试试多煮1min
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一辈子不长，对自己好点
4楼2012-10-18 08:04:28
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼
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8楼: Originally posted by hourl11 at 2012-10-18 14:54:45
还有就是胶最好不要重复煮着用哦

我看怎么很多人都说可以重复煮呢？
今天有个胶没有做好，然后我试着重新煮了一次，拿出来后不到半分钟就凝固了，根本不能用。
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一辈子不长，对自己好点
9楼2012-10-18 21:38:57
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼
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13楼: Originally posted by review at 2012-10-19 11:50:18
应该是胶的问题，没摇匀。可能是你倒胶时，胶太凉了。没用旧胶吧？

没有用旧的，但是我是发现我的胶凝的特别快

1.2g凝胶粉+40ml 0.5*TBE
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一辈子不长，对自己好点
16楼2012-10-19 13:46:52
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼
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11楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 09:03:08
不会是琼脂糖质量问题吧。重煮应该没问题的。煮好后冷却到40多度的时候加EB到胶。...

琼脂糖是新买的，西班牙产
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一辈子不长，对自己好点
17楼2012-10-19 13:48:19
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼
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18楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-19 14:42:35
你想分多大的片段啊，需要做3%的琼脂糖胶？太小的片段干脆跑PAGE胶了。

我的片段是200bp-300bp
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一辈子不长，对自己好点
19楼2012-10-19 15:49:47
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张玉2008

金虫 (小有名气)

胖胖鱼
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20楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-20 06:29:55
用1.5-2%的胶就行了，从来没上过3%的。...

恩，我打算下一步做2%的胶试试
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一辈子不长，对自己好点
21楼2012-10-20 15:59:58
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