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ysn5048

银虫 (小有名气)

[求助] 双酶切没有切开,怎么回事啊

本人最近想把目的片段连接在表达载体pET15b上,我的两条目的片段均约1000bp,下图为酶切回收前的鉴定图,左边15000的Marker,右边2000的Marker,15000Marker右边第一条带是pET15b质粒酶切的结果,第二条是T载体连目的片段的酶切结果,第三条什么也没有,第四条同样是pET15b质粒酶切的结果,第五条是T载体连另一目的片段的结果。

ysn20121015pet15b,T-t①,T-h⒄双酶切.jpg
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zhangby2002

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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ysn5048: 金币+1, 有帮助 2012-10-16 13:22:09
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-16 13:47:45
做双酶切鉴定时要注意一下几点:1.首先检查一下看目的片段是否连接在载体上。2.看你选择的酶是否合适,并且具有相同的buffer,酶是否同一品牌。3.加样顺序是否正确。4.酶切体系以及反应等操作严格要求。 祝成功
业精于勤,荒于嬉;行成于思,毁于随。
6楼2012-10-16 08:36:12
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