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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » sds电泳拖尾，求原因
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huangyan0517

金虫 (小有名气)

[求助] sds电泳拖尾，求原因

如图，条带有些拖尾，跑的是溶菌酶单体、二聚体、多聚体混合液，浓缩胶5%，分离胶15%，2倍上样buffer混合样品成一倍，每孔15ul，问题可能出在哪？分离胶tris测ph6.8，和要求的6.8基本一致，分离胶tris8.9，和要求8.8有点差别，问题大吗？电泳设置为80v，20min，120v，50min。搞不明白哪里出问题，另外灌完分离胶，我都是用1000ul的枪，加满封闭，管浓缩胶时水也有点残留，另外别人说加aps和temed要抽空气，难道真是这个原因？求高人指点

九月浓缩.jpg
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时间在哪里，成就就在哪里
1楼 2012-10-08 13:07:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-08 14:07:31
分离胶的Tris的pH是挺重要的，不准可能造成条带不sharp。灌好分离胶封闭不必加满，只要有大约0.5-1cm就行了，加的时候要缓慢均匀。做浓缩胶的时候尽量把水弄干，不过有一点点应该问题不大的。抽空气是为了减少溶液中的氧气含量，氧气会抑制胶的聚合。不抽也没多少关系，很多人只是稍稍多加一点点APS和TEMED。只要你的胶不是凝得特别慢就没必要抽气。不知道你的上样量是多少，有时候样品没处理好也会造成拖尾。
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2楼2012-10-08 13:51:41
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-08 13:51:41
分离胶的Tris的pH是挺重要的，不准可能造成条带不sharp。灌好分离胶封闭不必加满，只要有大约0.5-1cm就行了，加的时候要缓慢均匀。做浓缩胶的时候尽量把水弄干，不过有一点点应该问题不大的。抽空气是为了减少溶液中 ...

上样每孔15ul，ph我当时调的是8.8，可能时间长了，发生变化了
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时间在哪里，成就就在哪里
3楼2012-10-08 14:32:11
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by huangyan0517 at 2012-10-08 14:32:11
上样每孔15ul，ph我当时调的是8.8，可能时间长了，发生变化了...

我是想问一下你上了多少ug的蛋白，感觉是不是稍微有点过量了。你做的是考染还是荧光染色？还有就是样品里的离子强度过高的话也会造成胶跑不好。
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4楼2012-10-08 14:39:37
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青豆同学

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你左边的两个是什么？给我的感觉是你样品量大了，或者是上胶短了导致它们不在一个起跑线上开始分离
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
5楼2012-10-08 18:12:13
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