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huangyan0517

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[求助] sds电泳拖尾，求原因

如图，条带有些拖尾，跑的是溶菌酶单体、二聚体、多聚体混合液，浓缩胶5%，分离胶15%，2倍上样buffer混合样品成一倍，每孔15ul，问题可能出在哪？分离胶tris测ph6.8，和要求的6.8基本一致，分离胶tris8.9，和要求8.8有点差别，问题大吗？电泳设置为80v，20min，120v，50min。搞不明白哪里出问题，另外灌完分离胶，我都是用1000ul的枪，加满封闭，管浓缩胶时水也有点残留，另外别人说加aps和temed要抽空气，难道真是这个原因？求高人指点

九月浓缩.jpg

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时间在哪里，成就就在哪里

1楼 2012-10-08 13:07:42

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-08 14:07:31

分离胶的Tris的pH是挺重要的，不准可能造成条带不sharp。灌好分离胶封闭不必加满，只要有大约0.5-1cm就行了，加的时候要缓慢均匀。做浓缩胶的时候尽量把水弄干，不过有一点点应该问题不大的。抽空气是为了减少溶液中的氧气含量，氧气会抑制胶的聚合。不抽也没多少关系，很多人只是稍稍多加一点点APS和TEMED。只要你的胶不是凝得特别慢就没必要抽气。不知道你的上样量是多少，有时候样品没处理好也会造成拖尾。

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2楼2012-10-08 13:51:41

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huangyan0517

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-08 13:51:41
分离胶的Tris的pH是挺重要的，不准可能造成条带不sharp。灌好分离胶封闭不必加满，只要有大约0.5-1cm就行了，加的时候要缓慢均匀。做浓缩胶的时候尽量把水弄干，不过有一点点应该问题不大的。抽空气是为了减少溶液中 ...

上样每孔15ul，ph我当时调的是8.8，可能时间长了，发生变化了

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时间在哪里，成就就在哪里

3楼2012-10-08 14:32:11

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