应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 阳性克隆的筛选问题
51/1返回列表
查看: 3009  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)

[求助] 阳性克隆的筛选问题

请教各位虫友，最近我在做连接，在转化之后挑取平板上的单菌落进行菌落pcr，结果显示为阳性的克隆却在双酶切的时候没有目的片段，而且测序也没有信号。请问这是怎么回事呢？用什么方法检验阳性克隆比较科学呢？（注：菌落pcr时阴阳性对照都设置了，阴性没P出来，阳性P出来的条带比菌落亮）

[ Last edited by xuyan_1215 on 2012-9-19 at 17:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-19 17:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
xuyan_1215: 金币+2, ★有帮助 2012-09-20 14:41:45
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuyan_1215 at 2012-09-20 07:09:31
我也是这样做的，每次做完菌液pcr就送样测序，但是结果总是无信号，这假阳性的概率也太大了。。。...

那你得调整下连接，转化体系了。
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-20 12:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液PCR快速，简单，通量大，但是有假阳性率，一般就是菌液PCR后，酶切鉴定，然后测序，如果经费充足，或者节省时间的话，就是菌液PCR，然后直接测序。一般测序结果是判断标准
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-19 18:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyan_1215

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-19 18:17:10
菌液PCR快速，简单，通量大，但是有假阳性率，一般就是菌液PCR后，酶切鉴定，然后测序，如果经费充足，或者节省时间的话，就是菌液PCR，然后直接测序。一般测序结果是判断标准

我也是这样做的，每次做完菌液pcr就送样测序，但是结果总是无信号，这假阳性的概率也太大了。。。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-20 07:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuyan_1215: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-09-20 14:41:19
菌落PCR只能初步的判断下是否连接转化成功，但是假阳性率是非常高的，原因是因为裂解液残留的问题，你可以把你挑的几个阳性克隆进行扩大培养，然后提取质粒做质粒PCR和质粒酶切，这样就能确保没问题。
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
4楼2012-09-20 08:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 06:39 by l48hFd8Nwae2
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 05:26 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 21:29 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭