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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何知道表达的蛋白是几聚体
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笑笑2697

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何知道表达的蛋白是几聚体

我用大肠杆菌表达了一个蛋白，在真核中为四聚体，我现在想知道此蛋白在原核表达是几聚体，如何鉴定？之前跑过native-page因没有参照，只能确定它不是单体。
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1楼 2012-09-19 11:26:40
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littlestove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-20 08:36:49
SDS-PAGE可以知道单体的大小，Native-Page或分子筛可以知道天然状态分子量，二者结合即可知道聚合度
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2楼2012-09-19 17:11:47
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笑笑2697

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by littlestove at 2012-09-19 17:11:47
SDS-PAGE可以知道单体的大小，Native-Page或分子筛可以知道天然状态分子量，二者结合即可知道聚合度

请详细说一下怎么通过native page 知道天然分子量啊~
聚合度有什么关系呢？
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3楼2012-09-19 20:03:54
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littlestove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

native-page显示的就是天然分子量啊，蛋白质是活性状态，分子克隆书上有native梯度胶配制方法。用native分子量除以SDS-PAGE获得的单体分子量，就知道是几聚体
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4楼2012-09-20 10:07:38
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littlestove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

native-page显示的就是天然分子量啊，蛋白质是活性状态，分子克隆书上有native梯度胶配制方法。用native分子量除以SDS-PAGE获得的单体分子量，就知道是几聚体
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5楼2012-09-20 10:10:04
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笑笑2697

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by littlestove at 2012-09-20 10:10:04
native-page显示的就是天然分子量啊，蛋白质是活性状态，分子克隆书上有native梯度胶配制方法。用native分子量除以SDS-PAGE获得的单体分子量，就知道是几聚体

那native-page是以什么为参照确定它的分子量？不同蛋白等电点不同，等电点对蛋白的迁移也有影响啊，因此用什么作为native-page的参照呢。SDS-page有marker。
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6楼2012-09-20 11:54:46
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LZ可以去打个MS，就能知道现在的蛋白分子量，以及到底是几聚体了。
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7楼2012-09-21 13:30:03
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