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笑笑2697

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何知道表达的蛋白是几聚体

我用大肠杆菌表达了一个蛋白,在真核中为四聚体,我现在想知道此蛋白在原核表达是几聚体,如何鉴定?之前跑过native-page因没有参照,只能确定它不是单体。
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littlestove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-20 08:36:49
SDS-PAGE可以知道单体的大小,Native-Page或分子筛可以知道天然状态分子量,二者结合即可知道聚合度
2楼2012-09-19 17:11:47
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笑笑2697

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by littlestove at 2012-09-19 17:11:47
SDS-PAGE可以知道单体的大小,Native-Page或分子筛可以知道天然状态分子量,二者结合即可知道聚合度

请详细说一下怎么通过native page 知道天然分子量啊~
聚合度有什么关系呢?
3楼2012-09-19 20:03:54
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littlestove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

native-page显示的就是天然分子量啊,蛋白质是活性状态,分子克隆书上有native梯度胶配制方法。用native分子量除以SDS-PAGE获得的单体分子量,就知道是几聚体
4楼2012-09-20 10:07:38
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littlestove

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

native-page显示的就是天然分子量啊,蛋白质是活性状态,分子克隆书上有native梯度胶配制方法。用native分子量除以SDS-PAGE获得的单体分子量,就知道是几聚体
5楼2012-09-20 10:10:04
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笑笑2697

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by littlestove at 2012-09-20 10:10:04
native-page显示的就是天然分子量啊,蛋白质是活性状态,分子克隆书上有native梯度胶配制方法。用native分子量除以SDS-PAGE获得的单体分子量,就知道是几聚体

那native-page是以什么为参照确定它的分子量?不同蛋白等电点不同,等电点对蛋白的迁移也有影响啊,因此用什么作为native-page的参照呢。SDS-page有marker。
6楼2012-09-20 11:54:46
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
LZ可以去打个MS,就能知道现在的蛋白分子量,以及到底是几聚体了。
7楼2012-09-21 13:30:03
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