24小时热门版块排行榜    

查看: 2381  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] His Tag融合蛋白纯化

pET-28a/BL21表达得到目的蛋白,部分可溶,部分包涵体,使用Novagen的kit对可溶蛋白进行纯化遇到如下问题:使用BugBuster抽提试剂处理菌液后得到可用于上柱纯化的蛋白溶液置于4度保存过夜均发生沉淀,-20度冻存也出现沉淀(电泳检测过,目的蛋白就在沉淀中),这样还能继续上柱纯化可溶性蛋白吗?怎样才能使蛋白不发生沉淀?有人遇到类似的问题吗?请各位高手指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xyoung88

金虫 (初入文坛)

蛋白质沉淀是个很通常的问题,也没有特别有效的方法。你可以加10-30%glycerol看看是否能缓解。实在不行,该mbp-tag.
9楼2013-03-14 02:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
导致蛋白沉淀的原因很多。
主要还是PH问题,不知知道你的蛋白等电点是多少,抽提试剂的PH是不是在等电点附近,所以导致沉淀。
2楼2012-09-18 15:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-18 15:45:45
导致蛋白沉淀的原因很多。
主要还是PH问题,不知知道你的蛋白等电点是多少,抽提试剂的PH是不是在等电点附近,所以导致沉淀。

等电点是4.9,溶在PBS(PH7.4)里也沉淀的。还有别的可能吗?请教!
3楼2012-09-19 10:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-20 15:26:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by hyhl at 2012-09-19 10:30:53
等电点是4.9,溶在PBS(PH7.4)里也沉淀的。还有别的可能吗?请教!...

如果方便的话能不能说一下你的大致步骤,因为我不知道你的问题出在什么地方。
你的蛋白解冻后也会出现沉淀,4℃过夜也会沉淀。不知道你加了还原剂了没有,比如说DTT或者TCEP.还有,你的盐浓度是多少?
4楼2012-09-19 10:35:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见