24小时热门版块排行榜    

查看: 1638  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

[求助] PCR条件摸索

各位大侠。。。帮我看一下吧,从左到右分别是56度,58度,60度,61、62、63度,然后使阴性,MARKER。。。我的目的基因长度是1436bp。模板我用GADPH验证过的,所以这次P的时候就没有P内参。我想说的是既然我的阴性对照没有东西,说明我的引物没有引物二聚体,现在我想是不是应该改变一下PCR条件呢?帮忙分析一下吧。。。3Q so much。。。我想知道原因是什么呢?
我的PCR条件是94度 5min,94度40s,55-65度30s,72度3min,72度10min 总共35个循环。。。

zlf(9-13).jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

keepon
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2012-09-13 22:18:19
写错了 延伸2min。我这个引物有两篇文献是报道过的 用的就是这个引物来P的 所以我想应该没什么问题噻。。。...

如果说引物没有问题的话,会不会你的模板出现问题了,不知道你的模板怎么来的,会不会纯度不够,参杂着其他东西,另外你的PCR产物和Marker是点的同样的量吗,35个cycle你的PCR产物量太低了,一是有非特异性扩增,而是你的模板量少
6楼2012-09-13 23:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
从你的图看,貌似是你的退火温度有点高了,问什么不调低一点试一下呢?
持之以恒、永不放弃!
2楼2012-09-13 16:39:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

阁下为什么说温度有点高了呢?我觉得特异性不好的话应该是温度低了呢。。。我还想把温度调高试一下呢。。嘿嘿。。。不懂。。。还请赐教。。。
keepon
3楼2012-09-13 18:03:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物特异性差,而且根据梯度PCR看,高温引物特异性没有增加,反而影响了引物与模板的结合,造成产物减少,最好还是重新设计下引物,另外1.5KB 延伸3分钟太长了吧
4楼2012-09-13 18:40:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 C79jjtjAKjEn 2026-09-15 3/150 2026-09-18 03:30 by cITaGg3p5edr
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-18 02:54 by cITaGg3p5edr
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 6/300 2026-09-18 01:54 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-18 01:04 by cITaGg3p5edr
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 8/400 2026-09-17 23:28 by cuPZTDXS3VOd
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 22:53 by cuPZTDXS3VOd
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-17 22:39 by cuPZTDXS3VOd
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 5BDX0d0WFp7t 2026-09-15 4/200 2026-09-17 16:29 by 0ngsZVSCTS7z
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-17 16:03 by 0ngsZVSCTS7z
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 14:27 by ObVzqQQh1rrE
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-17 13:29 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-17 12:29 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +8 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 11:27 by UAIjTRMuUFoj
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:38 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:16 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 04:52 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
信息提示
请填处理意见