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sjjsy7银虫 (小有名气)
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胶回收老收不到，请教高手
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| 本人新手，最近在构载体，刚把基因都P出来，可酶切后老是收不到片段，各种方式都试过了还不行，现想问一下做过的前辈，做胶回收要注意些什么？还有就是哪个公司的试剂盒回收效率高点，我用的是天跟的，不过都放2年多了，马上要中期考核了，很着急，请各位高手帮忙！！！ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】应助回帖
1949stone: 回帖置顶 2012-09-17 17:19:48
1949stone: MolEPI+1, very good 2012-09-17 17:20:12
1949stone: MolEPI+1, very good 2012-09-17 17:20:12
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个人见解，胶回收重要点： 电泳要让目的条带与杂带分开，以防污染；电泳液最好换新的。切胶要完全。 溶胶58度，10分钟，期间混匀3次，保证充分融化。 冰浴约5分钟（此步非常重要，一般试剂盒中都说是冷却至室温，但是温度越低与柱子结合效率越高。不管是质粒提取试剂盒还是胶回收，包括后面的洗脱EB预热是一个道理，温度高柱子结合效率低，温度低结合效率高。所以试剂盒的保存条件是不高于35度，高温保质期短） 冰浴后上柱离心按步骤来。空甩后注意让乙醇挥发完全，直接用鼻子闻下即可，看是否有乙醇味道。 加洗脱液EB，60度放置2-3分钟后高速离心1次即可。 |
20楼2012-09-17 16:27:40
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