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sjjsy7

银虫 (小有名气)

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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 胶回收老收不到，请教高手

本人新手，最近在构载体，刚把基因都P出来，可酶切后老是收不到片段，各种方式都试过了还不行，现想问一下做过的前辈，做胶回收要注意些什么？还有就是哪个公司的试剂盒回收效率高点，我用的是天跟的，不过都放2年多了，马上要中期考核了，很着急，请各位高手帮忙！！！

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1楼 2012-09-01 22:37:26

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reallpf

木虫 (正式写手)

MolEPI: 6
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【答案】应助回帖

1949stone: 回帖置顶 2012-09-17 17:19:48
1949stone: MolEPI+1, very good 2012-09-17 17:20:12

个人见解，胶回收重要点：

电泳要让目的条带与杂带分开，以防污染；电泳液最好换新的。切胶要完全。
溶胶58度，10分钟，期间混匀3次，保证充分融化。

冰浴约5分钟（此步非常重要，一般试剂盒中都说是冷却至室温，但是温度越低与柱子结合效率越高。不管是质粒提取试剂盒还是胶回收，包括后面的洗脱EB预热是一个道理，温度高柱子结合效率低，温度低结合效率高。所以试剂盒的保存条件是不高于35度，高温保质期短）

冰浴后上柱离心按步骤来。空甩后注意让乙醇挥发完全，直接用鼻子闻下即可，看是否有乙醇味道。
加洗脱液EB，60度放置2-3分钟后高速离心1次即可。